Маълумот

Чӣ гуна метавон ҷамъшавии ҳуҷайраҳоро дар ҳуҷайраҳои суспензияи CHO бидуни истифодаи агенти зидди ҷамъшавӣ коҳиш дод?


роҳи беҳтарини нест кардани ҳуҷайраҳои суспензияи ҷамъшуда, ки барои трансфекция истифода мешаванд, кадом аст. Агентҳои зидди ҷамъшавӣ ба трансфекция халал мерасонанд ва аз ин рӯ истифода намешаванд. Гарчанде ки нигоҳ доштани зичии пасти ҳуҷайраҳо кӯмак мекунад, аммо дар муддати тӯлонӣ кӯмак намекунад.


Пас аз каме ба атроф нигаристан, ман якчанд ҳалли эҳтимолиро пайдо кардам, аммо онҳо ба саволи шумо ҷавоби қатъӣ нестанд ва санҷишро дар шароити таҷрибавии шумо талаб мекунанд, то бубинед, ки кадомаш беҳтар кор мекунад.

Ин саҳифа як пешниҳоди олиҷанобро дар бар мегирад ва он интихоби ҳуҷайраҳое мебошад, ки ҳангоми гузариш ҷамъ намешаванд, бо ҷамъ кардани ҳуҷайраҳо дар 15 мл васоити ахбори омма дар як найча ва бигзоред, ки ҳуҷайраҳои ҷамъшуда дар давоми 5 дақиқа бо қувваи ҷозиба ҷойгир шаванд ва баъд аз он боло гирифта шаванд. 1 мл ва гузариши он ва пас аз 20 порча бо истифода аз ҳамон техника, шумо бояд суспензияи ягонаи ҳуҷайраро ба даст оред. Огоҳии асосӣ ин интихоби вазнин барои ҳуҷайраҳои ҷамъшуда мебошад, ки метавонад дорои хосиятҳои муайяне бошад, ки барои тартиби мавриди таваҷҷӯҳи шумо номатлуб буда метавонанд, аз ин рӯ хуб мебуд, ки профили ифодаи РНК-ро барои мушоҳида кардани фарқиятҳо анҷом диҳед ва ҳатто онро нашр кунед! Дар байни тавсияҳо дар ин саҳифа истифодаи консентратсияи гуногуни Mn2+, Mg2+ ва Ca2+ дар васоити шумо (муштарӣ?) дохил мешаванд, зеро пайвастшавии ҳуҷайраҳо аз ҷониби интегринҳо, кадеринҳо ва интихобҳо танзим карда мешавад ва дар маҷмӯъ, Mn2+ наздикии лигандҳоро зиёд мекунад, Mg2+ ба пайвастшавӣ ба ҳуҷайраҳо мусоидат мекунад. , ва Ca2+ адгезияи ҳуҷайраҳоро, тавре ки дар ин ҷо зикр шудааст, коҳиш медиҳад. Шумо инчунин метавонед гепаринро санҷед, тавре ки дар ин мақола дар бораи ҳуҷайраҳои CHO санҷида шудааст ва бояд қайд кард, ки гепарин дар рафти тадқиқот афзоиши ҳуҷайраҳо, секрецияи антитело ва фаъолияти антигенро коҳиш надодааст, гарчанде ки ман боварӣ надорам, ки гепарин хоҳад буд ё не? ҳамчун агенти зидди ҷамъшавӣ тасниф карда шудааст ва оё он ба қобилияти ҳуҷайраҳо барои трансфексия халал мерасонад, аммо онро метавон тавассути трансфексияи GFP оддӣ санҷида ва ба самаранокии трансфексияи гепарин коркардшуда ва ҳуҷайраҳои назоратӣ, ки бо ҳар гуна гепарин гудохта шудааст, тафтиш карда шавад. .