Маълумот

Оё антителоҳои сершумор як антигенро пайваст карда метавонанд?

Оё антителоҳои сершумор як антигенро пайваст карда метавонанд?


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

Бо назардошти фарқияти андозаи байни антигенҳои молекулаи хурд ва антитело оё имкон дорад, ки антителоҳои сершумор ба як антиген пайваст шаванд, агар онҳо доменҳои гуногуни ин антигенро эътироф кунанд? Вақте ки антиген сафеда аст, на як молекулаи хурд, эҳтимол дорад, ки антителоҳои сершумор пайваст шаванд?


На танҳо имконпазир аст, ки антителоҳои сершумор як антигенро пайваст кунанд, вақте ки ин рӯй медиҳад, эҳтимолияти вокуниши пурраи иммуниро ба вуҷуд меорад.

Ин аст тавсифи консепсия аз ширкате, ки антителоҳоро барои таҳқиқот мефурӯшад. Барои фаҳмидани иқтибос, шумо бояд бидонед, ки қисми антиген, ки антитело мепайвандад, эпитоп номида мешавад.

Азбаски антиген метавонад якчанд эпитопҳои гуногун дошта бошад, як қатор антителоҳо метавонанд ба сафеда пайваст шаванд. Вақте ки ду ё зиёда макони ҳатмии антиген якхелаанд, антитело метавонад бо антиген пайванди мустаҳкамтаре ба вуҷуд орад, назар ба он ки танҳо яке аз сайтҳои антитело пайваст бошад. Антигенҳои дорои якчанд маконҳои ҳатмии якхела бисёрвалентӣ номида мешаванд ва антителоҳо қодиранд, ки онро сахттар пайваст кунанд.

Ин аст мақолае, ки дар байни чизҳои дигар, аҳамияти кластер дар B-ҳуҷайраҳоро тавсиф мекунад, вақте ки ретсепторҳои сершумори B-ҳуҷайраҳо ба як антигени бисёрвалентӣ мепайванданд.


Рангҳои сегонаи иммунофлуоресцентӣ бо антителоҳое, ки дар як намуд ба вуҷуд омадаанд, барои омӯзиши шакли мураккаби иннерватсияи хеморецепторҳои дохили шуш

Мушкилоти умумӣ дар иммуноцитохимия ин таҳияи як усули боэътимоди аломатгузории бисёркарата мебошад, вақте ки антителоҳои ибтидоӣ бояд дар як намуд истифода шаванд. Мо протоколи иммунодетсияи се антигенро дар як доруи матоъ бо истифода аз антителоҳои ибтидоии конъюгатнашуда, ки дар як намуд тавлид шудаанд, таҳия кардем. Муайян кардани иммуноцитохимиявии синтазаи оксиди азотии нейронӣ, пептидҳои генҳои кальцитонин ва калбиндин D28k дар шуши каламушҳо нишон доданд, ки қисми ҷисмҳои нейроэпителиалии шуш ба таври интихобӣ бо ҳадди аққал се популяцияи гуногуни нахи асаб тамос мегиранд. Антигени аввал бо истифода аз тақвияти сигнали тирамид муайян карда шуд, ки ин усули хеле ҳассосест, ки имкон медиҳад, ки антителоҳои аввалияро аз ҳадди муайянкунии антителоҳои дуюмдараҷаи флуоресцентӣ фаротар гузаранд. Антигени дуюм аз ҷониби як антиденои дуюмдараҷаи яквалентии Фаб бо флюорофор пайвастшуда визуалӣ карда шуд, ки ҳамзамон дастрасии антитело дуюмдараҷаи сеюмро ба антитело дуюми ибтидоӣ бозмедорад. Ғайр аз он, моновалентии порчаи Fab аз пайвастани антитело сеюми ибтидоӣ бо антитело дуюмдараҷа монеъ мешавад. Технологияи рангкунии сегона, ки дар ин ҷо тавсиф шудааст, ба таври умум қобили татбиқ аст, танҳо маҳсулоти дар тиҷорат дастрасро истифода мебарад ва имкон медиҳад, ки се антиген дар як омодагӣ бо антителоҳои ибтидоӣ, ки дар як намуд парвариш карда мешаванд, муайян карда шаванд.


Таҳлили мултиплексӣ барои ченкунии ҳамзамон антитело ба антигенҳои сершумори Plasmodium falciparum

Антидено ба Plasmodium falciparum ба таври классикӣ бо истифода аз таҳлили иммуносорбенти бо фермент алоқаманд (ELISA) чен карда мешаванд. Гарчанде ки хеле ҳассос аст, ин техника меҳнатталаб аст, вақте ки миқдори зиёди намунаҳо бояд зидди антигенҳои сершумор тафтиш карда шаванд. Технологияи массиви таваққуф (SAT) метавонад як алтернативаи ELISA бошад, зеро он имкон медиҳад, ки антителоҳоро бар зидди антигенҳои сершумор ҳамзамон бо миқдори ками намуна андозад. Ин тадқиқот кӯшиш кард, ки системаи нави мултиплекси SAT барои чен кардани антителоҳо бар зидди нӯҳ антигени номзади ваксинаи вараҷа, аз ҷумла сафедаҳои рекомбинантӣ аз ду варианти сафедаи сатҳи мерозоит 1, ду варианти антигени апикалӣ мерозоит 1, антигени ҳатмии эритросит 175, протеини сатҳи мерозоит 3, ва пептидҳо аз протеини циркумпорозоит, антигени сатҳи эритроситҳои ҳалқавӣ ва антигени марҳилаи ҷигар 1. Консентратсияи гуногуни антигенҳо ба микросфераҳо бо суроғаҳои гуногуни спектр пайваст карда шуданд ва намунаҳои плазма аз калонсолони Камерун тавассути SAT дар форматҳои моно- ва мултиплекс ва аз ҷониби ELISA. Миқдори оптималии сафеда, ки барои анҷом додани таҳлили SAT лозим буд, аз 10 то 100 маротиба камтар аз он барои ELISA лозим буд. Байни форматҳои ягона ва мултиплекс (R > ё = 0,96), ҳатто вақте ки ду варианти як антиген истифода мешуданд, мувофиқати аъло пайдо шуд. Таҳлили мултиплекс зуд, такроршаванда буд, камтар аз 1 мул плазма талаб мекард ва бо ELISA таносуби хуб дошт. Ҳамин тариқ, SAT як воситаи муҳими нави омӯзиши аксуламали иммунӣ ба вараҷаро дар шумораи зиёди аҳолӣ, ҳатто вақте ки миқдори плазмаи дастрас маҳдуд аст, масалан, ҳангоми омӯзиши кӯдакони навзод ё хуни ангуштон.

Рақамҳо

Муайян кардани миқдори оптималии…

Муайян кардани миқдори оптималии антиген барои ҷуфт кардани микросфераҳо. Миқдори гуногуни…

Муқоисаи MFI байни моноплекс…

Муқоисаи MFI байни таҳлилҳои моноплексӣ ва мултиплексӣ ва такроршавандагии таҳлил. Микросфераҳо, ки ба ҳам пайвастанд…

Муносибати байни натиҷаҳо аз…

Муносибати байни натиҷаҳои ELISA ва мултиплекс SAT. Ҳамагӣ 50…


Мулоҳизаҳои ибтидоии интихоби антитело барои таҳлили вестерн blot

Поликлоналӣ ва антителоҳои моноклоналӣ ва рекомбинантӣ

ПоликлоналӣМоноклоналӣРекомбинант
ТаърифҶамъоварии антитело аз ҳуҷайраҳои гуногуни В, ки эпитопҳои сершуморро дар як антиген эътироф мекунандАнтителоҳои ягонае, ки аз ҷониби клонҳои якхелаи ҳуҷайраҳои В тавлид мешаванд, ки як эпитопро дар ҳамон антиген эътироф мекунандАнтиденои ягонае, ки аз ДНК рекомбинантӣ гирифта шудааст. Метавонад дар сатҳи ДНК тағир дода шавад ё барои тавлиди ҳавзи муайяни антитело истифода шавад.
АфзалиятҳоҲассосияти баланд. Бисёре аз антителоҳо дар ҳавзи поликлоналӣ метавонанд эпитопҳоро ба ҳадафи антитело пайваст кунандМутобиқати бисёр ба бисёр. Аксар вақт хуб тавсифшуда, дониши таърихии клонҳои мушаххас, нашрияҳо барои иҷроиш дар blotting ғарбӣ.Таъминоти устувор, дарозмуддат бо мувофиқати лот ба лот. Ба дрейфти хати ҳуҷайра ҳассос нест.
КамбудиҳоТағйирёбии ҳавзи антитело метавонад ба муайянкунии номувофиқ оварда расонад. Эпитопҳои ба ҳадаф монанд метавонанд ба ошкор кардани бандҳои номуайян мусоидат кунанд.Ҳассосияти ошкор аз фаровонӣ ва экспозицияи як эпитоп вобаста аст. Гузариши хати ҳуҷайра метавонад боиси тағироти нозук ва дарозмуддат дар антитело гардад.Хеле махсусгардонидашуда ва вобаста ба эпитоп. Давомнокии дарозтари рушд. Шояд ба оптимизатсияи пешакӣ ниёз дорад. Одатан нархи баландтар.

Антиденаҳои поликлоналӣ, моноклоналӣ ва рекомбинантӣ ҳама барои blotting ғарбӣ хуб кор мекунанд. Антителоҳои поликлоналӣ як ҳавзи антителоҳои моноклоналӣ мебошанд, ки метавонанд аз эмкунӣ то эмкунӣ ва лот-ба-лот фарқ кунанд. Антителоҳои поликлоналӣ эпитопҳои сершумори антигенро эътироф мекунанд ва аз ин рӯ одатан нисбат ба антителоҳои моноклоналӣ, ки танҳо як эпитопро эътироф мекунанд, ҳассостаранд. Ин метавонад фоидаовар бошад, вақте ки фаровонии эпитоп, ниқоби эпитоп ё таъсири эпитопҳо нигарон аст. Антиденоҳои поликлоналӣ арзонтаранд ва барои истеҳсол вақти камтарро сарф мекунанд. Антителоҳои моноклоналӣ барои мувофиқати онҳо ва дар бисёр ҳолатҳо тавсифи васеъ ва таърихи нашр баҳо дода мешаванд. Антиденоҳои моноклоналӣ одатан аз ҷониби хатҳои ҳуҷайра тавлид мешаванд, ки як клони инфиродии антитело тавлид мекунанд. Ин хатҳои ҳуҷайра (ё гибридомаҳо) дар фарҳанги ҳуҷайра парвариш карда мешаванд, вақте ки антитело барои истеҳсол лозим аст. Мисли ҳама гуна хати ҳуҷайраҳои зуд-зуд паҳншаванда, ин хатҳои ҳуҷайра метавонанд ба тадриҷан тағирот ворид шаванд, ки ба ҳосили истеҳсоли антитело ё ҳатто хусусиятҳои антитело таъсир мерасонанд. Антителоҳои рекомбинантӣ беҳтарин вариант барои истеҳсоли пайвастаи антитело аз ҳайвонот ва пайдарпайии лот ба лот мебошанд. Антителоҳои рекомбинантӣ тавассути трансфексияи хатҳои ҳуҷайраҳои истеҳсолӣ бо ДНК-и рекомбинантӣ, ки иммуноглобулинҳои дилхоҳро рамзгузорӣ мекунанд, истеҳсол карда мешаванд. Антителоҳои рекомбинантӣ як қатор манфиатҳо доранд: Онҳоро дар маконҳои мушаххас тағир додан мумкин аст, то хусусиятҳои дилхоҳро ба IgGҳо илова кунанд ва онҳо ба дрейфти хати ҳуҷайраҳо, ба монанди моноклоналҳои гибридомавӣ дучор намешаванд. Антителоҳои рекомбинантиро барои тавлиди ҳавзҳои антителоҳои рекомбинантӣ, ба монанди антителоҳои ибтидоии поликлоналӣ ё антителоҳои дуюмдараҷаи суперклоналӣ муттаҳид кардан мумкин аст.

Антиденоҳо одатан дар PBS ё буферҳои шабеҳ тоза карда мешаванд, аммо дар баъзе мавридҳо барои нигоҳ доштани хусусиятҳои муайяни антитело ё ҳосили антитело омодагии хоми антитело ба монанди хуноба ё моеъи асцит заруранд. Муҳим аст, ки протоколҳои blotting ғарбӣ оптимизатсия карда шаванд, то таъсири ифлосҳои дар доруҳои антителоҳои хом мавҷудбударо ба замина кам кунанд.

Муайянкунии мустақим ва ғайримустақим

Усулҳои мустақим ва ғайримустақими ошкор метавонанд дар blotting ғарбӣ истифода шаванд. Ҳар як усул афзалиятҳо ва нуқсонҳои худро пешниҳод мекунад. Бо усули муайянкунии мустақим, барои муайян кардани антигени манфиатдор дар доғ антителоҳои ибтидоӣ бо фермент ё флюорофор истифода мешаванд. Дар усули ошкоркунии ғайримустақим, аввал барои пайвастшавӣ ба антиген як антитело ибтидоии номбаршуда истифода мешавад. Баъдан, антитело ибтидоӣ бо истифода аз антитело дуюмдараҷаи бо фермент ё флюорофор пайвастшуда муайян карда мешавад. Усули ғайримустақим нисбат ба усули мустақим бартариҳои зиёд дорад, ки дар зер тавсиф мешаванд.

  • Танҳо як антитело лозим аст
  • Бо бартараф кардани марҳилаи инкубатсияи дуюмдараҷаи антитело вақтро сарфа мекунад
  • Заминаи имконпазирро тавассути реактивии дуввумдараҷаи антитело дар баъзе намунаҳо нест мекунад.
  • Баланд бардоштани сигнал, зеро якчанд дуюмдараҷаи нишондодашуда ба ҳар як ибтидоӣ мепайвандад
  • Имкониятҳои зиёде бо истифода аз HRP, Alexa Fluor ё Alexa Fluor Plus бо нишони антителоҳои дуюмдараҷа
  • Бо истифода аз антителоҳои дуюмдараҷаи флуоресцентӣ бо муайянкунии мултиплексӣ вақтро сарфа кунед
  • Амплификацияи минбаъдаи сигнал бо ёрии дуюмдараҷаи биотинӣ ва стрептавидини флуоресцентӣ ё бо фермент ишорашуда имконпазир аст.
  • Нишон метавонад ба ҳатмии ҳадаф халал расонад, ки дар натиҷа ҳассосияти паст ва замина баландтар мешавад.
  • Интихоби антителоҳои ибтидоии мустақим маҳдуд аст
  • Қадамҳои иловагӣ талаб карда мешаванд
  • Потенсиали ҳатмии ғайримуқаррарӣ, ки метавонад замина дар баъзе намунаҳоро афзоиш диҳад.

Мулоҳизаҳои намудҳои мизбон

Якчанд намудҳо барои тавлиди антителоҳо истифода мешаванд, ки метавонанд дар замимаҳои blot western истифода шаванд. Бештар: муш, харгӯш, каламуш, буз, хар ва мурғ. Кадом намуди антителоҳои ибтидоӣ барои интихоб аз он вобаста аст, ки оё ҳадафи ягона тафтиш карда мешавад ё ҳадафҳои сершумор дар озмоиши мултиплекси ғарбӣ тафтиш карда мешаванд. Ҳангоми таҳқиқи танҳо як антиген дар як вақт, аз ҷиҳати назариявӣ ҳама гуна намуди мизбонро истифода бурдан мумкин аст, аммо аксари антителоҳои асосии тадқиқотӣ барои blotting ғарбӣ аз харгӯшҳои иммунизатсияшуда (поликлоналӣ, моноклоналӣ, рекомбинантӣ) ё мушҳо (моноклоналҳои гибридомавӣ) истеҳсол карда мешаванд. Баъзе намудҳои мизбон нисбат ба дигарон бартариҳои иловагӣ медиҳанд, масалан аз рӯи андоза ё биологияи иммунии онҳо. Ҳангоми муқоисаи муш ё харгӯш, масалан, харгӯшҳо одатан дар таҳаммулпазирии эмкунӣ беҳтаранд ва умри дарозтар аз мушҳо доранд. Ғайр аз он, харгӯшҳо нисбат ба мушҳо репертуари табиии антителоҳои гуногунро намоиш медиҳанд, ки харгӯшҳоро барои тавлиди антителоҳои поликлоналӣ, моноклоналӣ ва рекомбинати харгӯш мизбони маъмул месозад. Ҳангоми ҳадафи тавлиди антителоҳои мувофиқтарини моноклоналӣ ё рекомбинантӣ барои blotting ғарбӣ, репертуари бештари антителоҳои аз харгӯш тавлидшуда имкон медиҳад, ки бомуваффақият скрининг, изолятсия ва клонкунии антителоҳои рекомбинатии наздики баланд. Ин махсусан ҳангоми ҳадафи сохтани антителоҳои ғарбӣ ба эпитопҳои душвортаре муҳим аст, ки онҳоро бо системаҳои дигар тавлид кардан ғайриимкон аст.

Ҳангоми анҷом додани мултиплекси ғарбӣ, антителоҳои ибтидоиро аз намудҳои гуногуни мизбон барои ҳар як ҳадафи тафтишшаванда истифода баред. Идеалӣ, омезиши антителоҳоро аз ду намуди ба ҳам наздик ба монанди каламуш ва харгӯш истифода баред ва аз комбинатсияи монанди муш ва каламуш ё бузу гӯсфанд худдорӣ кунед. Ин дар интихоби антителоҳои дуюмдараҷаи мувофиқ барои кам кардани реактивии эҳтимолии антитело кӯмак хоҳад кард, ки метавонад ба натиҷаҳои нофаҳмо оварда расонад.

Мулоҳизаҳои мултипликатсияи мизбон

Аввалин намуди мизбони антителоНамудҳои дуюмдараҷаи антитело
КаламушХаргӯш
МушХаргӯш
БузХаргӯш ё муш
МушКаламушX
БузГӯсфандX

Антиденаҳои тасдиқшудаи Western blot

Гарчанде ки антителоҳо барои шинохтани антигени мушаххас тарҳрезӣ шудаанд, онҳо метавонанд дар ҳама барномаҳо баробар кор накунанд. Антителоҳоеро интихоб кунед, ки махсус барои блтинги ғарбӣ таъин шудаанд ё ин ки ба сифати барнома номбар кардани blotting ғарбӣ номбар шудаанд. Илова бар ин, тасдиқ кардани он муҳим аст, ки антитело ба протеини модарӣ ё денатуратӣ хос аст, то муайян кунад, ки оё SDS-PAGE ё PAGE-и модарӣ бояд иҷро карда шавад.

Ҳангоми интихоби антитело аввалия, тасдиқ кунед:

  1. Антитело барои blotting ғарбӣ тасдиқ карда шудааст
  2. Хусусияти антитело нисбат ба протеини модарӣ ё денатуратшуда

Антиденоҳои инвитроген аз равиши дақиқи санҷиши 2 қисм мегузаранд. Қисми 1: Тафтиши мушаххаси ҳадаф, Қисми 2: Санҷиши амалии функсионалӣ. Тафтиши мушаххаси ҳадаф кӯмак мекунад, ки антитело ба ҳадафи дуруст пайваст шавад. Аксарияти антителоҳо бо назардошти барномаҳои мушаххас таҳия шудаанд. Санҷиши он, ки антитело дар як барномаи мушаххас натиҷаҳои қобили қабул тавлид мекунад, қисми дуюми тасдиқи фаъолияти антитело мебошад. Дар бораи раванди тасдиқи антитело Invitrogen бештар маълумот гиред.


Оё санҷишҳои антитело лозим нест, ки конфигуратсияҳои сершумори антителоҳоро муайян кунанд?

Ман чунин таассурот дорам, ки антителоҳои сершумор бо сохторҳои гуногуни сайти ҳатмӣ метавонанд аз ҷониби одамони гуногун барои як патоген сохта шаванд. Ҳар як порчаи адабиёте, ки ман хондам, ба "анттитело" барои як патоген ишора мекунад, ба монанди он як чизи ягонаи монолитӣ аст, дар он ҷо дар асл ман фикр мекунам, ки антитело барои як патоген воқеан чизҳои гуногунандешӣ бо дараҷаи муайяни тағирёбанда мебошанд? Ягон "антитело" барои SARS-CoV-2 "антитело" вуҷуд надорад.

Масалан, SARS-CoV-2 метавонад дар сохторҳои сафедаи онҳо минтақаҳои сершумори беназир дошта бошад, ки дар онҳо антителоҳои гуногун тавлид мешаванд, аз ин рӯ як бемори барқароршуда метавонад дар муқоиса бо дигар бемори барқароршуда антителоҳои каме фарқ кунад, аммо ҳардуи антителоҳои онҳо то ҳол бо дигар антитело пайваст хоҳанд шуд. минтақаҳои беназири SARS-CoV-2.

Ҳатто ширкатҳое ҳастанд, ки номзадҳои сершумори антителоҳои мухталифро ба як чанд нафар коҳиш додаанд, ки қобилиятҳои махсусан баланди безараргардонии зидди SARS-COV-2 доранд, нукта дар он аст, ки антителоҳои гуногун метавонанд ба як патоген пайваст шаванд.

Пас, вақте ки одамон дар бораи санҷиши антитело сӯҳбат мекунанд, онҳо дар бораи чӣ гап мезананд?

Оё санҷиш воқеан мавҷудияти онро муайян мекунад чандкарата антителоҳои гуногун, ки ҳамаи онҳо бо вирус таъсири ҳатмӣ нишон доданд?

Ё санҷишҳо танҳо як конфигуратсияи мушаххаси антителоро муайян мекунанд ва метавонанд конфигуратсияҳои дигари антителоро аз даст диҳанд, ки дар натиҷа манфии бардурӯғ ба вуҷуд меоянд (бемор воқеан сироят ёфта буд ва антитело тавлид кардааст, на танҳо онҳое, ки санҷиш барои онҳо мушаххас аст).

Эҳтимол, ин каме аз он вобаста аст, ки чӣ гуна санҷиш гузаронида мешавад. Ман боварӣ дорам, ки аксари санҷишҳо протеини вирусии иммобилизатсияшуда доранд ва антителоҳоеро, ки ба он сафеда пайваст мешаванд, муайян мекунанд. Ҳама гуна антителоҳое, ки протеини дигар ё эпитопи сафедаро мепайвандад, ки аз сабаби он ки он чӣ гуна ҳаракат накардааст, дастнорас аст, ошкор карда намешавад. Аммо санҷишҳо инчунин одатан танҳо хондани бинарӣ медиҳанд, бинобар ин, агар ягон антитело пайваст шаванд, он мусбат хоҳад буд.

Шумо дуруст мегӯед, ки вокуниши антитело бисёр антителоҳои гуногунро дар бар мегирад. Аз эҳтимол дур нест, ки касе, ки зидди вирус антитело дорад, ягон протеинеро, ки барои санҷиш истифода мебаранд, надошта бошад. Фарз мекунем, ки санҷиш хуб анҷом дода шуд.

Шумо комилан дуруст ҳастед, ки дар маҷмӯъ, антителоҳое, ки як шахс тавлид кардааст, метавонад аз антителоҳое, ки шахси дигар тавлид кардааст, фарқ кунад. ки аслан фарк кардани антителохои мушаххасро ба касалй хеле душвор гардонад.

Хушбахтона, вақте ки мо санҷишҳои антитело мегузаронем, мо мавҷудияти конформатсияи мушаххаси антителоро озмоиш намекунем. Ба мо лозим нест, ки сохтори махсуси сафедаи антителоҳои зидди коронавирусро муайян кунем. Мо танҳо бояд донем, ки оё онҳо ҳозиранд ё не. ва мо ин корро тавассути гирифтани намунаи хуноба, ки метавонад антитело ба як бемории мушаххасро дар бар гирад ё надошта бошад ва онро ба намунаи антигени бемории мавриди назар қарор медиҳем. Агар антитело ба ин беморӣ мавҷуд бошад, реаксияи намоён ба амал меояд, зеро антителоҳо майл ба пайваст кардани антигенҳои сершумор доранд ва ҷамъшавии намоёни комплексҳои антиген ва антитело ба амал меояд.

Ҳамин тавр, муҳим нест, ки кадом макони ҳатмӣ антитело эътироф мекунад. Танҳо муҳим аст, ки антитело антигенро эътироф кунад.

Ҳоло интихоби антиген худ як мушкили техникӣ аст. Аксари ҳуҷайраҳои бадани инсон пайваста ба рӯи худ порчаҳои хурди сафедаҳоеро, ки онҳо махсус сохтаанд, туф мекунанд, то системаи масуният метавонад ба он қисмҳо нигоҳ кунад ва дар сурати ошкор кардани ягон чизи нодуруст вокуниш нишон диҳад. Худи он порчаҳо антигенҳо мебошанд. Азбаски ин порчаҳо худашон зергурӯҳҳои вирус мебошанд, роҳи осонтарини кафолат додани он, ки антигени шумо ҳамаи антителоҳоро ба вуҷуд меорад, истифодаи тамоми вирус аст. Аммо, бо сабабҳои маълум, талаб кардани вируси фаъол барои санҷишҳои ташхисӣ камтар аз беҳтарин аст. Ҳамин тавр, дар маҷмӯъ, санҷишҳои антитело як қисми протеини вирусиро истифода мебаранд. аммо муҳим аст, ки боварӣ ҳосил кунед, ки ин сафеда барои вирусе, ки шумо озмоиш кардан мехоҳед, беназир аст ё шумо метавонед аксуламалҳои антителоҳоро бинед, ки воқеан ба вируси мушаххаси шумо хос нестанд. Санҷиши антитело CDC пайдарпаии сафедаи хӯшаро истифода мебарад.


Биологияи буз

Аз сабаби ин эпитопҳои сершумор, зиёда аз як намуди антитело метавонанд ба антигени мувофиқ пайваст шаванд ва азбаски антителоҳо ду даст доранд, як антитело баъзан метавонад ба ду антиген пайваст шавад. Агар миқдори антиген ба антитело дар мувозинат бошад, он гоҳ комплексҳои калони антиген/антиденоҳоро ба вуҷуд овардан мумкин аст. Ин боиси рехтани комплекс мегардад.

Дар таҳлили AGID, як диски агар (ки як навъ желе сахт аст) дар табақчаи петри омода карда мешавад. Дар як сӯрохи сӯрохиҳо кушода, антиген ва дар сӯрохи дигар маҳлули антитело ҷойгир карда мешавад. Маҳлулҳо аз сӯрохиҳо ба агар паҳн мешаванд. Вақте ки антиген бо антитело вохӯрад, пайвастшавӣ ба амал меояд. Дар минтақае, ки сатҳи дурусти антитело ба антиген мавҷуд аст, хати тунук ва сафед ба вуҷуд меояд, ки ба чашми дастнорас намоён аст.

Санҷишҳои AGID дар робита бо ҳатмии мушаххас хеле дақиқанд, аз ин рӯ мусбатҳои бардурӯғ каманд, аммо санҷиш сатҳи пасти антителоҳоро муайян намекунад. Ин боиси манфиҳои бардурӯғ мегардад, вақте ки субъекти санҷиш дар марҳилаҳои аввали сироят қарор дорад ва сатҳи пасти антитело дорад.


Поликлоналӣ нисбат ба моноклоналӣ

Дар лаборатория антителоҳо аксар вақт ҳамчун поликлоналӣ ё моноклоналӣ тасниф карда мешаванд. Антителоҳои поликлоналӣ як популятсияи гетерогении антитело мебошанд, ки минтақаҳои сершуморро (эпитопҳо номида мешаванд) як антиген эътироф мекунанд. Ин антителоҳо аксар вақт ҷавоби мустаҳкамтар медиҳанд, аммо эҳтимоли бештар бо сафедаҳои шабеҳ вокуниш нишон медиҳанд.

Моноклоналӣ ба он ишора мекунад, ки антителоҳо аз як клон тавлид мешаванд ва ҳамон эпитопи антигенро эътироф мекунанд. Ин молекулаҳо одатан хеле мушаххасанд, аммо ба гум шудани эпитоп тавассути тағир додани антиген ҳассостаранд.

Қобилияти антителоҳо барои эътироф кардани сафедаҳои мушаххас дар бисёр расмиёти лабораторӣ муфид аст, ба монанди иммуноблоттинг (Western Blots), FACS, иммуногистохимия (IHC) ва ELISA. Умуман, ин равандҳо ду антителоҳои гуногунро истифода мебаранд: ибтидоӣ, ки сафедаи мавриди назарро эътироф мекунад ва антитело дуюмдараҷа, ки барои антитело аз организме, ки антителоҳои ибтидоиро тавлид кардааст, хос аст. Антиденои дуюмдараҷа одатан ба як кимиёвӣ ё фермент пайваст карда мешавад, то сигнали натиҷаро тақвият диҳад.


Сайти якҷоякунии антиген

  • се дар занҷири вазнин ва
  • се дар занҷири сабук
  • сохторҳои антитело
  • системаи генетикӣ, ки антителоҳоро бо ин қадар CDR-ҳои гуногун тавлид мекунад.
  • сохтори сеюми як бозуи антитело хоси лизозим дар сафедаи тухми мурғ (аз рости боло) бо
  • лизозим (аз чапи поён).
  • минтақаи доимии занҷири сабук (CЛ. ) ва минтақаи якуми доимии занҷири вазнин (CҲ )
  • минтақаҳои тағйирёбандаи вазнин (ВҲ ) ва занҷирҳои сабук (ВЛ. )
  • минтақаи сеюми гипертағйирёбандаи занҷирҳои вазнин (Hv3H) ва сабук (Hv3L). Аҳамияти ҷуфти сеюми гипертағйирёбанда ё минтақаҳои муайянкунандаи комплементарӣ дар пайваст кардани эпитоп ҳам ба антителоҳо ва ҳам ба ретсепторҳои ҳуҷайраи Т барои антиген хос аст. Ин маънои хуб дорад, зеро имкониятҳои гуногунии генетикӣ дар он сайтҳо нисбат ба CDR-ҳои якум ва дуюм хеле зиёданд. [Истинод]
  • Gln121 як глутамин аст, ки хусусияти бартаридоштаи эпитоп дар лизоцим мебошад.

Тасвири дуюм (инчунин аз ҷониби доктор Амит) як модели пуркунандаи фосилаи ҳамон антитело бо занҷири сабук бо зард ва занҷири вазнин бо кабуд мебошад. Манзара ба сатхи пайвасткунандаи эпитоп (аз чап) ва эпитоп ба лизозима (аз рост) нигарист. Дар комплекси антиген-антитело ду сатҳ ба ҳам мувофиқат мекунанд. 17 боқимондаи кислотаи аминокислотаҳо, ки бо лизоцим дар комплекси антиген-антитело тамос мегиранд, рақамгузорӣ карда мешаванд (1&ndash7 дар занҷири L, 8&ndash17 дар занҷири H. 16 боқимондаи аминокислотаҳои лизоцима, ки бо антитело, яъне эпитопи онро ташкил медиҳанд, низ ҳастанд. раками 14 — Глн-121.

Дар қувват Пайвастагии антитело ба антигени он номида мешавад наздикӣ. Муносибат дар саҳифаи алоҳида баррасӣ карда мешавад. Истинод ба он.


Поликлоналӣ ва антителоҳои моноклоналӣ

Антиденои поликлоналӣ чист?
Антиденои поликлоналӣ маҷмӯи антителоҳоро аз ҳуҷайраҳои гуногуни В муаррифӣ мекунад, ки эпитопҳои сершуморро дар ҳамон антиген эътироф мекунанд. Ҳар яке аз ин антителоҳои инфиродӣ эпитопи беназиреро эътироф мекунанд, ки дар он антиген ҷойгир аст.

  • Истеҳсоли арзон.
  • Истеҳсоли зуд. Антиденои тозашуда барои истифода дар камтар аз чор моҳ омода аст.
  • Нигоҳ доштани осон.
  • Хеле устувор ва таҳаммулпазир ба тағирёбии pH ё буфер.
  • Наздикии умумии антитело нисбат ба антиген аз сабаби эътирофи эпитопҳои сершумор.
  • Умуман, қобилияти муайян кардани эпитопҳои сершумор ошкоркунии мустаҳкамтар медиҳад.
  • Ҳассосияти бештарро барои муайян кардани сафедаҳо, ки дар як намуна дар миқдори кам мавҷуданд, пешниҳод мекунад, зеро антителоҳои сершумор ба эпитопҳои сершумори сафеда пайваст мешаванд.
  • Идеалӣ ҳамчун антитело забт дар Sandwich ELISA. Қобилияти бештар барои зуд гирифтани сафедаи мақсаднок.
  • Муносибати олии антитело одатан ба зудтар пайваст шудан ба антигени мақсаднок оварда мерасонад. Идеалӣ дар таҳлилҳое, ки гирифтани зуди сафеда ба монанди IP ё ChIP талаб мекунанд.
  • Ҳангоми таҳлили сафедаҳо, ки дар эпитопҳои инфиродӣ тағироти ночиз, ба монанди денатуратсия, полиморфизм ё тағироти конформатсияро нишон медиҳанд, ба таври назаррас мустаҳкамтар аст.
  • Бартарӣ барои истифода дар муайян кардани протеини модарӣ дар намудҳои гуногуни таҳлил.
  • Пайвастшавӣ бо тамғакоғазҳои антитело хеле осонтар аст. Эҳтимоли камтар ба қобилияти пайвастшавӣ таъсир мерасонад.
  • Тағйирпазирии байни партияҳои гуногун, ки дар ҳайвоноти гуногун дар вақтҳои гуногун тавлид мешаванд
  • Потенсиали баландтари реактивии салиб бо сабаби эътирофи эпитопҳои сершумор
  • Одатан тозакунии наздикии хуноба барои кам кардани реактивии салиб талаб карда мешавад

Антиденои моноклоналӣ чист?
Антиденои моноклоналӣ, баръакс, антитело аз як антитело, ки ҳуҷайраи B истеҳсол мекунад, намояндагӣ мекунад ва аз ин рӯ танҳо бо як эпитопи беназир мепайвандад. Ҳар як антиденои инфиродӣ дар омехтаи поликлоналӣ аз ҷиҳати техникӣ як антитело моноклоналӣ аст, аммо ин истилоҳ одатан ба раванде дахл дорад, ки тавассути он ҳуҷайраи воқеии В ҷудо карда мешавад ва ба хати ҳуҷайраи гибридомаи намиранда пайваст карда мешавад, то миқдори зиёди антителоҳои якхела тавлид шавад.

  • Метавонад миқдори зиёди антителоҳои якхела тавлид кунад. Якчандӣ ба якхела.
  • Хусусияти баланд ба як эпитоп. Эҳтимолияти коҳиши реактивии салиб.
  • Дар таҳлилҳое, ки миқдори миқдори сафедаҳоро талаб мекунанд, метавонад натиҷаҳои беҳтаре диҳад.
  • Истехсоли он хеле гаронтар аст.
  • Барои истеҳсол ва таҳияи клони гибридӣ вақти хеле бештарро талаб мекунад.
  • Тағйироти хурд дар сохтори эпитоп аксар вақт антиденои моноклоналиро қодир нест, ки сафедаи мақсаднокро муайян кунад.
  • Шароити нигоҳдории клон бештар серталаб аст.
  • Фарҳанги ҳуҷайра ва қобилиятҳои тозакунӣ талаб карда мешавад.
  • Барои муайян кардани сафеда дар ҳолати денатуратшуда ё конформатсияи тағирёфта устувортар аст.
  • Камтар барои барномае, ки гирифтани зуди сафедаи ҳадафро талаб мекунад.
  • Ба шароити рН ва буфер ҳассостар аст.
  • Ҳангоми тамғагузорӣ ба тағйироти ҳатмӣ бештар осебпазир аст.
  • Барои ҷуброни бисёре аз ин нуқсонҳо, истеҳсоли як ҳавзи якчанд антителоҳои моноклоналӣ лозим аст. Ин одатан хароҷот ва вақтро манъ мекунад.

Хулоса:
Барои барномаҳое, аз қабили истеҳсоли ташхис ва таҳияи доруҳои терапевтӣ, ки миқдори зиёди антителоҳои якхеларо, ки ба як эпитопи ягона хосанд, талаб мекунанд, антителоҳои моноклоналӣ метавонанд як ҳалли беҳтарин бошанд. Аммо барои барномаҳои тадқиқотии умумӣ, бартариҳои антителоҳои поликлоналӣ одатан аз чанд бартариҳое, ки антителоҳои моноклоналӣ медиҳанд, бартарӣ доранд. Бо тозакунии наздикии хуноба бар зидди ҳадафҳои антигенҳои хурд, бартариҳои антителоҳои поликлоналӣ боз ҳам васеътар мешаванд. Антителоҳои моноспесификӣ, ки дар боби оянда баррасӣ мешаванд, он чизеро пешниҳод мекунанд, ки мо беҳтарини ҳарду ҷаҳон мешуморем, бо омезиши хосияти баланди антитело бо арзиши кам ва истеҳсоли босуръат.


Таъриф

Антиген ба заҳролуд ё дигар моддаи бегона дахл дорад, ки аксуламали иммуниро дар бадан, бахусус истеҳсоли антитело ба вуҷуд меорад, дар ҳоле ки гаптен ба молекулаи хурде дахл дорад, ки ҳангоми пайвастан бо як интиқолдиҳандаи калонтар ба монанди сафеда, метавонад истеҳсолро ба вуҷуд орад. аз антителоҳое, ки махсус ба он пайваст мешаванд (дар ҳолати озод ё якҷоя). Ин ду таъриф фарқи асосии байни антиген ва гаптенро шарҳ медиҳанд.

Антигенҳои пурра ё нопурра

Антигенҳо молекулаҳои мукаммал мебошанд, дар ҳоле ки гаптенҳо антигенҳои нопурра мебошанд. Аз ин рӯ, ин фарқи асосии байни антиген ва гаптен аст.

Пайвастшавӣ ба комплекси MHC

Ғайр аз он, қобилияти пайвастшавӣ ба комплекси MHC ба фарқияти байни антиген ва гаптен мусоидат мекунад. Яъне антигенҳо метавонанд ба комплекси MHC пайваст шаванд, дар ҳоле ки гаптенҳо наметавонанд ба комплекси MHC пайваст шаванд.

Пайвастшавӣ ба антитело

Фарқи дигари байни антиген ва гаптен дар он аст, ки антигенҳо метавонанд мустақиман ба антитело пайваст шаванд, дар ҳоле ки гаптенҳо мустақиман ба антитело пайваст карда наметавонанд.

Ҷавоби иммунитетӣ

Илова бар ин, фарқи муҳими байни антиген ва гаптен дар он аст, ки антигенҳо метавонанд худашон як вокуниши иммуниро ба вуҷуд оранд, дар ҳоле ки гаптенҳо худашон аксуламали иммуниро ба вуҷуд оварда наметавонанд.

Хулоса

Хулоса, антигенҳо молекулаҳое мебошанд, ки метавонанд худашон вокуниши иммуниро ба вуҷуд оранд, дар ҳоле ки гаптенҳо бояд ба як молекулаи интиқолдиҳанда пайваст шаванд, то як антигени мукаммал шаванд, ки аксуламали иммуниро ба вуҷуд меорад. Ҳам антиген ва ҳам иловаи интиқолдиҳандаи гаптен ҳамчун иммуногенҳо хизмат мекунанд. Ҳамин тариқ, фарқи асосии байни антиген ва гаптен қобилияти мустақилона ба вуҷуд овардани аксуламали иммунӣ мебошад.

Истинод:

1. «Антигенҳо». Lumen|Анатомия ва физиологияи беканор, Дар ин ҷо дастрас аст

Ҳушдори тасвир:

1. “Антитело” Аз ҷониби Fvasconcellos 19:03, 6 майи 2007 (UTC) – Варианти рангаи тасвир:Antibody.png, аслан кори Ҳукумати Иёлоти Муттаҳида (Домени ҷамъиятӣ) тавассути Commons Wikimedia
2. “Hapten” аз ҷониби MantOs – Кори худ (CC BY-SA 3.0) тавассути Commons Wikimedia

Дар бораи муаллиф: Лакна

Лакна, хатмкардаи биологияи молекулавӣ ва биохимия, биологи молекулавӣ аст ва ба кашфи чизҳои марбут ба табиат таваҷҷӯҳи васеъ ва ҷиддӣ дорад