Маълумот

7.14: Усулхои клонкунй — биология


7.14: Усулҳои клонсозӣ

Усулҳои пешрафта дар биологияи молекулавӣ ва биотехнология

Усулҳои пешрафта дар биологияи молекулавӣ ва биотехнология: дастури амалии лаборатория маълумотномаи мухтасар оид ба протоколҳо ва усулҳои умумӣ барои таҷрибаҳои пешрафтаи молекулавӣ ва биотехнология мебошад. Ҳар як боб ба усули дигар тамаркуз карда, шарҳи мухтасар пеш аз чуқур омӯхтани раванд дар равиши зина ба зина пешкаш мекунад. Усулҳои фаро гирифташуда истихроҷи геномии ДНК бо истифода аз бромди цетил триметиламмоний (CTAB) ва истихроҷи хлороформ, усулҳои хроматографӣ, ELISA, гибридизатсия, электрофорези гел, таҳлили нуқтаҳо ва усулҳои омӯзиши реаксияҳои занҷири полимеразиро дар бар мегиранд. Протоколҳои лабораторӣ ва тартиби корбарии стандартии таҷҳизоти калидӣ низ муҳокима карда мешаванд, ки шарҳи дастурдиҳанда барои кори лабораторӣ медиҳанд.

Ин дастури амалӣ ба пешрафтҳо ва навовариҳои навтарин дар усулҳои таҳқиқоти биологияи молекулавӣ ва биотехнология тамаркуз карда, ба муҳаққиқон ва таҷрибаомӯзон дар такмил ва пешрафти методологияи худ ва баланд бардоштани кори онҳо ба сатҳи оянда кӯмак мерасонад.

Усулҳои пешрафта дар биологияи молекулавӣ ва биотехнология: дастури амалии лаборатория маълумотномаи мухтасар оид ба протоколҳо ва усулҳои умумӣ барои таҷрибаҳои пешрафтаи молекулавӣ ва биотехнология мебошад. Ҳар як боб ба як усули гуногун тамаркуз мекунад, ки пеш аз амиқтар ба расмият дар равиши қадам ба қадам шарҳи умумӣ медиҳад. Усулҳои фаро гирифташуда истихроҷи геномии ДНК бо истифода аз бромди цетил триметиламмоний (CTAB) ва истихроҷи хлороформ, усулҳои хроматографӣ, ELISA, гибридизатсия, электрофорези гел, таҳлили нуқтаҳо ва усулҳои омӯзиши реаксияҳои занҷири полимеразиро дар бар мегиранд. Протоколҳои лабораторӣ ва расмиёти стандартии кор барои таҷҳизоти асосӣ низ муҳокима карда мешаванд, ки шарҳи дастурамалро барои кори лабораторӣ таъмин мекунанд.

Ин дастури амалӣ ба дастовардҳои навтарин ва навовариҳо дар усулҳои таҳқиқи биологияи молекулавӣ ва биотехнология тамаркуз карда, ба муҳаққиқон ва амалкунандагон методологияи худро такмил ва такмил медиҳад ва кори худро ба зинаи дигар мебарад.


Муқаддима

Клонизатсияи молекулавӣ ба ҷудо кардани пайдарпаии ДНК аз ҳама гуна намудҳо (аксар вақт ген) ва ворид кардани он ба вектор барои паҳншавӣ, бидуни тағир додани пайдарпаии аслии ДНК дахл дорад. Пас аз ҷудо шудан, клонҳои молекулавӣ метавонанд барои тавлиди нусхаҳои зиёди ДНК барои таҳлили пайдарпаии генҳо ва/ё барои ифода кардани сафедаи натиҷавӣ барои омӯзиш ё истифодаи функсияи сафеда истифода шаванд. Клонҳо инчунин метавонанд идора карда шаванд ва мутатсия карда шаванд in vitro барои тағир додани ифода ва вазифаи сафеда.

  1. Ҷудокунии порчаҳои ДНК-и мақсаднок (аксар вақт ҳамчун замима номида мешавад)
  2. Пайвастшавӣ ба вектори клонкунии мувофиқ, эҷоди молекулаҳои рекомбинантӣ (масалан, плазмидҳо)
  3. Табдил додани плазмидҳои рекомбинантӣ ба бактерия ё дигар мизбони мувофиқ барои паҳншавӣ
  4. Скрининг/интихоби ҳостҳое, ки дорои плазми рекомбинати пешбинишуда

Ин чор қадами пешгирикунанда бодиққат якҷоя карда шуда, аз ҷониби лабораторияҳои сершумор, аз охири солҳои 1960 ва ибтидои солҳои 70-ум сар карда шуданд. Хулосаи кашфиёте, ки клонинги анъанавии молекулиро дар бар мегиранд, дар саҳифаҳои минбаъда тавсиф карда шудаанд.

Таърихи клонкунӣ