Маълумот

Плазмидҳоро чӣ гуна бояд интиқол диҳам?


Ман 10 мкл минипрепи вектории худро ба ҳамкор дар бастаи парафилмшудаи 1,5 мл эпендорф фиристодам ва ба конуси 50 мл бо каме пӯшиши коғазӣ пур кардам. Аммо, дар роҳ ҳодисае рӯй дод ва ҳангоми расидан дар найча чизе (моеъ) набуд. Онҳо дар бораи кушодани парафилм кушода ё шикастани найчаи микроцентрифуга ҳеҷ шарҳе надоданд, аз ин рӯ ҳеҷ чизи девонае рӯй надодааст, аммо чизе рӯй дод.

Роҳи боэътимоди интиқоли плазмидҳо кадом аст?


Хулоса

  • 10 uL miniprep плазмидӣ дар сарпӯши найча пошида шуда бошад (AnnaF)
  • найи эпендорф метавонад ҳангоми интиқоли ҳаво фишорро паст карда, имкон дод, ки 10 uL гурезад ва бухор шавад
  • ҳалли: Пеш аз интиқоли ҳавоӣ хурдакакҳои худро бо ҳаво хушк кунед ё шуста кунед (Ҷонас).

Тафсилот

Тавре ки AnnaF навиштааст, 10 uL плазмиди шумо метавонист дар сарпӯш пинҳон ё дар атрофи қубур пароканда шуда, холӣ ба назар мерасид. Шумо бояд бо ҳамкорони худ санҷед, то боварӣ ҳосил кунед, ки онҳо онро центрифуга кардаанд.

Тибқи ҳуҷҷати федералӣ оид ба интиқоли маводи зудвайроншаванда (pdf) ва коғазе, ки ҳарорат ва фишори интиқолҳои ҳавоиро чен мекунад (pdf), интиқолҳои ҳавоии fedex ва ups метавонанд дар муҳити пасти фишори тақрибан 0,56 - 0,74 атмосфера (atm) дучор шаванд. Дар ин фишорҳои нисбатан паст, шояд найчаи эпендорф, ки дар 1 атм мӯҳр баста шудааст, рахна кунад. Ҳуҷҷатҳо инчунин қайд мекунанд, ки интиқоли заминӣ, ки аз болои санглох мегузарад (яъне дар Колорадо) метавонад ~ 0,64 атмро эҳсос кунад.

Пас, шояд найчаи эппендорфи 1,5 мл-и шумо ҳангоми интиқол фишорро паст карда бошад?

Якчанд озмоишҳо оид ба қобилиятнокии фишори қубурҳои эпендорф ҷолиб мебуд.

Дар робита ба саволи аслӣ, дар соли 2007 ман китобхонаи ҳазорон мини-препҳоро ба садҳо корбарон омода ва фиристодам (fedex). 1uL miniprep ба чоҳҳои плитаҳои 384-чоҳ рехта шуд ва дар ҳаво хушк карда шуд, сипас бо алюминий мӯҳр карда шуд ва сипас ба почта фиристода шуд. Истифодабарандагон чоҳро бо 10 uL об дубора об мекунанд. Умуман он кор мекунад.


Роҳи комилан бехатари интиқоли плазмидҳо гузоштани онҳо дар коғази филтр мебошад (ба протокол ва фиристодани мактуб нигаред. Хеле арзонтар.


Оё онҳо кӯшиш карданд, ки қубурро центрифуга кунанд, то он ҷо тамоми моеъро ба поён тела диҳад? Ман медонам, ки махсусан ҳангоми кор бо чунин миқдори кам, ки ҳатто каме ҷунбонидан он метавонад мундариҷаро дар тамоми қубур пароканда кунад. Мо пештар аз лабораторияхои дигар плазмидхо гирифта будем. Умуман, плазмидҳо дар қубурҳои микроцентрифугаи бурдашуда дар дохили як навъ канистр фиристода мешаванд. Он гоҳ дар як сардтар кафк бо яхи хушк бастабандӣ карда мешавад, то ҳама чизро сард нигоҳ дорад.


Азбаски қубурҳоро дар почта кӯфтан мумкин аст, роҳи бехатартарини интиқоли плазмидҳо ин аст, ки чанд uL ба коғази филтр резед ва сипас онро печонед, то онро бо парафилм мӯҳр кунед ва варақаи муфассалро дар бораи мундариҷаи он пур кунед.

Барори кор.


Мо ба чунин ҳолатҳо дучор шудем, ки лабораторияҳои дигар ба мо плазмидҳо фиристоданд (ё вақте ки мо қубурҳои қадимиро аз қуттиҳои нигоҳдорӣ дар -20 берун кардем) ва аз он вақт инҷониб усули коғази филтрро қабул кардем. Нуктаи дигаре, ки бояд қайд кард, ин аст, ки шумо метавонед танҳо 10 мкл обро ба найчаи "холӣ" (Mac) илова кунед ва 1 мкл обро барои табдил истифода баред. Он ҳамеша барои мо кор мекард. ДНК ба назар ноаён аст!


Ман инчунин тавсия медиҳам, ки микрограммаи ДНК-и плазмиди худро дар як пораи коғази филтр тоза кунед (коғази филтр барои истихроҷ дар охири қабулкунанда муҳим аст). Инчунин, хеле муфид аст, агар шумо миқдори ДНК-ро (тақрибан) ба таври возеҳ нишон диҳед ва ДНК-и холишударо дар қалам давр занед, то дар бораи буридани доираи коғази филтри дорои ДНК номуайянӣ набошад.

Дар охири қабул шумо бояд ҳамеша коғазро фавран ях кунед ё ДНК-ро аз коғаз дар буфери TE ё об ҷудо кунед ва сипас ях кунед. Нокомии ин кор оқибат ба таназзули ДНК-и ДНК-и плазмид оварда мерасонад ва пас шумо бояд интиқоли дигарро интизор шавед.


Плазмидҳо

Дэвид П. Кларк,. Мишел Р. МакГи, дар биологияи молекулавӣ (Нашри сеюм), 2019

2 Хусусиятҳои умумии плазмидҳо

Плазмидҳо одатан молекулаҳои даврии ДНК мебошанд, гарчанде ки баъзан плазмидҳое мавҷуданд, ки хаттӣ ё аз РНК сохта шудаанд. Онҳо метавонанд ҳамчун як ё якчанд нусха пайдо шаванд ва метавонанд аз ним даҳҳо то садҳо ген дошта бошанд. Плазмидҳо танҳо дар дохили ҳуҷайраи мизбон афзоиш ёфта метавонанд. Аксарияти плазмидҳо бактерияҳо зиндагӣ мекунанд ва воқеан тақрибан 50% бактерияҳои дар ваҳшӣ мавҷудбуда як ё якчанд плазмидҳоро дар бар мегиранд. Плазмидҳо инчунин дар организмҳои олӣ ба монанди хамиртуруш ва занбӯруғҳо мавҷуданд. Доираи 2 микрон хамиртуруш (баъдтар муҳокима карда мешавад) як мисоли маъруфест, ки барои истифода ҳамчун вектори клонкунӣ тағир дода шудааст.

Аксарияти плазмидҳо даврашакл буда, аз ДНК сохта шудаанд ва аз хромосомаҳо хеле хурдтаранд.

Дар рақами нусхабардорӣ шумораи нусхаҳои плазмид дар ҳар як ҳуҷайраи бактериявӣ мебошад. Барои аксари плазмидҳо, он дар як хромосома 1 ё 2 нусха аст, аммо барои баъзе плазмидҳои хурд, ба монанди плазмидҳои CoE, он метавонад то 50 ё бештар аз он бошад. Шумораи нусхаҳо ба қувваи хусусиятҳои плазмидӣ, махсусан муқовимати антибиотикҳо таъсир мерасонад. Чӣ қадаре ки нусхаи плазмид дар як ҳуҷайра зиёд бошад, ҳамон қадар нусхаҳои генҳои муқовимати антибиотикҳо зиёд мешаванд ва аз ин рӯ, ҳамон қадар сатҳи муқовимати антибиотикҳо баланд мешавад.

Андозаи плазмидҳо хеле гуногун аст. F-плазмиди Escherichia coli Дар ин бобат хеле миёна аст ва тақрибан 1% андозаи онро ташкил медиҳад E. coli хромосома. Аксарияти плазмидҳои сершумор хеле хурдтаранд (плазмидҳои ColE тақрибан 10% андозаи плазми F-ро ташкил медиҳанд). Плазмидаҳои хеле калон, ки то 10% андозаи хромосомаро ташкил медиҳанд, баъзан пайдо мешаванд, аммо кор кардан бо онҳо душвор аст ва шумораи ками онҳо дуруст тавсиф карда шудаанд (ниг. Қуттии 23.02).

Вакте ки геноми бактерияи грам-манфй Вибрио вабо, ангезандаи бемории вабо, секвенсия карда шуд, маълум шуд, ки он аз ду хромосомаи даврашакл иборат аст аз 2,961,146 ва 1,072,314 bp. Якҷоя, ин тақрибан 4 миллион ҷуфти асосиро ташкил медиҳад ва тақрибан 3900 сафедаро рамзгузорӣ мекунад - тақрибан ҳамон миқдори иттилооти генетикӣ, ки E. coli. Бисёре аз генҳо, ки берун аз бактерияҳои рӯда пайдо мешаванд, тавре ки аз таркиби гуногуни заминаи онҳо бармеояд, дар хромосомаи хурдтар пайдо шуданд. Бисёре аз ин генҳо ба генҳои хос гомология надоранд ва вазифаи номаълум доранд. Хромосомаи хурдтар инчунин системаи забти генҳои интегронӣ дорад (ниг. Боби 25: ДНК мобилӣ) ва генҳои "нашъамандӣ" -ро, ки маъмулан дар плазмидҳо пайдо мешаванд (дар оянда муҳокима хоҳанд шуд) дорад. Ғайр аз он, хромосомаи хурдтар бо механизми дигар аз хромосомаи калон такрор мешавад. Дар асл, хромосомаи хурдтар системаи репликатсияро бо оилаи плазмидҳои васеъ паҳншуда мубодила мекунад. Чунин ба назар мерасад, ки хромосомаи хурдтар ҳамчун плазмид ба вуҷуд омадааст, ки тавассути ҷамъ кардани генҳо аз манбаъҳои гуногуни беруна то андозаи ҳозираи худ калон шудааст. Шояд беҳтар аст, ки хромосомаи хурдтарро ҳамчун "мегаплазмид" баррасӣ кунем."Маълумоти пайдарпайии геном нишон медиҳанд, ки тақрибан 10% бактерияҳо чунин мегаплазмидҳоро доранд, гарчанде ки андозаи онҳо хеле фарқ мекунад. Дар аксари ин ҳолатҳо, хромосомаи калон тақрибан ҳамаи генҳои барои функсияҳои муҳими ҳуҷайра, ба монанди сафеда, РНК ва синтези ДНК заруриро дорад. Дар баъзе ҳолатҳо, чунин мегаплазмидҳо метавонанд худро ба бактерияҳои алоқаманд тавассути конъюгация интиқол диҳанд.

Баъзе плазмидҳо дар як ё ду нусха дар як ҳуҷайра мавҷуданд, дар ҳоле ки дигарон дар якчанд нусхаҳо пайдо мешаванд.

Плазмидҳо генҳоро барои идоракунии давраҳои зиндагии худ ва баъзе плазмидҳо генҳое доранд, ки ба хосиятҳои ҳуҷайраи мизбон таъсир мерасонанд. Ин хосиятҳо аз плазмид то плазмид хеле фарқ мекунанд, ки беҳтаринаш муқовимат ба антибиотикҳои гуногун мебошад. Плазмидҳои криптӣ онҳое мебошанд, ки дар ҳуҷайраи мизбон ягон фенотипи муайяншаванда надоранд. Плазмидҳои криптӣ эҳтимолан генҳоеро доранд, ки хусусиятҳои онҳо то ҳол номаълуманд. Плазмидҳое, ки барои мақсадҳои гуногун тағир дода шудаанд, дар таҳқиқоти биологияи молекулавӣ истифода мешаванд ва аксар вақт барои интиқоли генҳо ҳангоми муҳандисии генетикӣ истифода мешаванд.

Доираи мизбони плазмидҳо ба таври васеъ фарқ мекунад. Баъзе плазмидҳо бо якчанд бактерияҳои ба ҳам наздик маҳдуданд, масалан, F-плазмида танҳо зиндагӣ мекунад E. coli ва бактерияҳои марбут ба рӯда ба монанди Шигелла ва Салмонелла. Дигарон дорои доираи васеи мизбон мебошанд, масалан, плазмидҳои оилаи P- метавонанд дар садҳо намудҳои гуногуни бактерияҳо зиндагӣ кунанд. Гарчанде ки ҳоло "P" одатан ҳамчун "фаҳшоӣ" ҳисобида мешавад, аз сабаби доираи ғайриоддии мизбонашон, ин плазмидҳо дар ибтидо аз он ном гирифта шудаанд. Pseudomonas, бактерияе, ки дар он онхо кашф карда шудаанд. Онҳо аксар вақт барои муқовимат ба антибиотикҳои сершумор, аз ҷумла пенициллинҳо масъуланд.

Баъзе плазмидҳо метавонанд худро аз як ҳуҷайраи бактериявӣ ба ҳуҷайраи дигар гузаронанд, ки моликияти он маълум аст интиқолпазирӣ . Бисёре аз плазмидҳои миёнаҳаҷм, ба монанди плазмидаҳои навъи F ва P, метавонанд ин корро анҷом диҳанд ва онҳоро Tra+ (интиқоли мусбат) меноманд. Азбаски интиқоли плазмид зиёда аз 30 генро талаб мекунад, танҳо плазмидҳои миёна ё калон ин қобилият доранд. Плазмидаҳои хеле хурд, ба монанди плазмидҳои CoE, танҳо ДНК-и кофӣ барои ҷойгир кардани генҳои лозимиро надоранд. Бо вуҷуди ин, бисёр плазмидҳои хурд, аз ҷумла плазмидҳои CoE доранд сафарбар кардан , маънои онро дорад, ки онҳо метавонанд тавассути плазмидҳои худ интиқолшаванда сафарбар карда шаванд [яъне, онҳо Mob + (сафарбарӣ-мусбат) мебошанд. Аммо, на ҳама плазмидҳои интиқол-манфӣ сафарбар карда мешаванд. Баъзе плазмидҳои интиқолшаванда (масалан, F-плазмида) инчунин метавонанд генҳои хромосомаҳоро сафарбар кунанд. Маҳз ҳамин мушоҳида имкон дод, ки генетикаи бактериявӣ бо истифода аз он инкишоф ёбад E. coli. Аз ин рӯ, механизми интиқоли плазмидҳо ва шароитҳои зарурӣ барои интиқоли генҳои хромосомӣ дар боби 28, Генетикаи бактериявӣ баррасӣ карда мешаванд.

Баъзе плазмидҳо метавонанд худро байни ҳуҷайраҳои бактериявӣ интиқол диҳанд ва баъзеи онҳо метавонанд генҳои хромосомаро интиқол диҳанд.

2.1 Оилаҳои плазмидӣ ва номувофиқӣ

Ду плазмиди гуногун, ки ба як оила тааллуқ доранд, наметавонанд дар як ҳуҷайра якҷоя зиндагӣ кунанд. Ин маълум аст номувофиқӣ . Плазмидҳо дар ибтидо аз рӯи номувофиқӣ тасниф шуда буданд ва аз ин рӯ оилаҳои плазмидӣ аксар вақт ҳамчун гурӯҳҳои номувофиқӣ маълуманд ва бо ҳарфҳои алифбо (F, P, I, X ва ғайра) таъин карда мешаванд. Плазмидҳои як гурӯҳи номувофиқатӣ дар генҳои такрорӣ ва тақсимоти худ пайдарпаии ДНК-и хеле шабеҳ доранд, гарчанде ки генҳои дигари онҳо метавонанд хеле фарқ кунанд. Дар як ҳуҷайра мавҷуд будани ду ё зиёда плазмидҳо комилан имконпазир аст, ба шарте ки онҳо ба оилаҳои гуногун тааллуқ доранд. Ҳамин тавр, плазмиди навъи P як ҳуҷайраро бо плазмиди оилаи F-ро хушбахтона мубодила мекунад (расми 23.03).

Расми 23.03. Мутобиқати плазмидҳо

Плазмидҳо бо пайдоиши гуногуни репликатсия ва генҳои такрории гуногун қодиранд дар як ҳуҷайраи бактерия зиндагӣ кунанд ва мувофиқ ҳисобида мешаванд (аз чап). Ҳангоми тақсимоти ҳуҷайра, ҳарду намуди плазмид такрор мешаванд, аз ин рӯ, ҳар як ҳуҷайраи духтар ҳарду плазмидро ба мисли ҳуҷайраи модар мерос мегиранд. Аз тарафи дигар, агар ду плазмид пайдоиш ва генҳои репликатсияи якхела дошта бошанд, онҳо номувофиқанд ва ҳангоми тақсимоти ҳуҷайра такрор карда намешаванд (аз рост). Ба ҷои ин, ду плазмид ба ҳуҷайраҳои гуногуни духтар тақсим карда мешаванд.

Плазмидҳо ба оилаҳое тақсим карда мешаванд, ки аъзоёни онҳо генҳои репликатсияи хеле шабеҳ доранд.

2.2 Плазмидҳои баъзан хаттӣ ё аз РНК сохта шудаанд

Гарчанде ки аксари плазмидҳо молекулаҳои даврии ДНК мебошанд, баъзан истисноҳо мавҷуданд. Плазмидҳои хаттии ДНК-и дуқабата дар бактерияҳои гуногун ва занбӯруғҳо ва растаниҳои олӣ пайдо шудаанд. Плазмидҳои хаттии беҳтарин тавсифшуда дар он чанд бактерия, ба монанди Боррелия ва Стрептомицес ки хромосомахои хаттй низ доранд. Репликонҳои хаттии ДНК дар бактерияҳо аз ҷониби теломерҳо ба монанди хромосомаҳои хаттии эукариотҳо муҳофизат карда намешаванд. Ба ҷои ин, мутобиқсозии гуногуни инфиродӣ ақсоро аз эндонуклеазҳо муҳофизат мекунанд.

Плазмидаҳои хатӣ дорои сохторҳои махсус барои муҳофизат кардани нугҳои ДНК мебошанд.

Дар Боррелия, дар асл ягон ақсои озоди ДНК вуҷуд надорад. Ба ҷои ин, пайдарпаии мӯйҳои ДНК-и якқатор дар охири ҳарду плазмидаҳои хатӣ ва хромосомаҳо ҳалқаҳоро ташкил медиҳанд (расми 23.04A). Баъзе вирусҳои ҳайвонот, аз қабили иридовирус, ки табларзаи хукҳои африқоиро ба вуҷуд меорад, сохторҳои шабеҳ доранд. Намудҳои гуногуни Боррелия боиси бемории Лайм ва табларзаи такрорӣ мегардад. Чунин ба назар мерасад, ки плазмидҳои хаттии онҳо ҳам гемолизинҳоро, ки ҳуҷайраҳои хунро вайрон мекунанд ва сафедаҳои рӯизаминиро, ки бактерияҳоро аз системаи иммунии мизбон муҳофизат мекунанд, рамзгузорӣ мекунанд. Ҳамин тариқ, ба монанди бисёр бактерияҳои дигари сироятӣ, омилҳои вирусии Боррелия инчунин асосан аз плазмид иборатанд.

Расми 23.04. Сохторҳои охири плазмидаҳои хатӣ

$A) Плазмидањои хаттии Боррелия дар нӯгҳо ҳалқаҳои мӯйро ташкил медиҳанд. $B) Плазмидањои хаттии Стрептомицес бо сафедаҳо, ки ақсои ДНК-ро муҳофизат мекунанд, фаро гирифта шудаанд. Агар плазмидҳои хатӣ нуқҳои дуқабатаро фош мекарданд, ин боиси рекомбинатсия, таъмир ё таназзули системаҳо мешуд.

Плазмидаҳои хаттии Стрептомицес дар ҳақиқат молекулаҳои ҳақиқии хаттии ДНК бо ақсоҳои озод мебошанд. Онҳо дар нӯги ДНК такрорҳои баръакс доранд, ки онҳоро сафедаҳо якҷоя мекунанд. Илова бар ин, сафедаҳои махсуси муҳофизатӣ ба нӯги 5'-и ДНК ба таври ковалентӣ пайваст карда мешаванд. Натиҷаи соф сохтори ракеткаи теннис аст (расми 23.04B). ДНК-и аденовирус, аксари плазмидҳои хаттии эукариотӣ ва баъзе вирусҳои бактериявӣ сохторҳои шабеҳро нишон медиҳанд.

Плазмидҳои хатӣ дар байни эукариотҳо низ мавҷуданд. Занбӯруғ Flammulina velutipes, ки маъмулан бо номи занбурўғи энокӣ маълум аст, дар дохили митохондрияи худ ду плазмидаи хаттии хеле хурд дорад. Якчанд растаниҳои олӣ низ маълуманд, ки дар митохондрияҳои худ плазмидҳои хатӣ доранд. Хамиртуруши ширӣ, Kluyveromyces lactis, плазмиди хатӣ дорад, ки одатан дар ситоплазма такрор мешавад. Аммо, баъзан плазмид ба ядро ​​​​кӯчида мешавад, ки дар он ҷо ҳамчун доира такрор мешавад. Сиркуляризатсия бо сабаби рекомбинатсияи мушаххаси макон бо дарназардошти такрорҳои баръакс дар охири шакли хаттии плазмид ба амал меояд. Нақши физиологии ин плазмидҳо норавшан аст.

Плазмидҳои РНК каманд ва аксари онҳо суст тавсиф мешаванд. Намунаҳо аз растаниҳо, занбӯруғҳо ва ҳатто ҳайвонот маълуманд. Баъзе штаммҳои хамиртуруш Saccharomyces cerevisiae плазмидҳои хаттии РНК доранд. Чунин плазмидҳои РНК дар митохондрияҳои баъзе навъҳои растаниҳои ҷуворимакка мавҷуданд. Плазмидҳои РНК ҳам ҳамчун шаклҳои якқатор ва ҳам дуқатор пайдо мешаванд ва ба тарзе монанд ба вирусҳои муайяни РНК такрор мешаванд. Плазмидаи РНК полимеразаи аз РНК вобастаро рамзгузорӣ мекунад, ки синтези худро роҳнамоӣ мекунад. Баръакси вирусҳои РНК, плазмидҳои РНК генҳои сафедаҳои куртаро дар бар намегиранд. Муқоисаҳои пайдарпай нишон медиҳанд, ки аксари плазмидҳои РНК танҳо версияҳои ноқиси вирусҳои РНК мебошанд, ки пас аз гум кардани қобилияти ҳаракат аз ҳуҷайра ба ҳуҷайра ҳамчун зарраҳои вирус ҷои истиқомати доимӣ гирифтаанд.


Плазмидро дар коғаз барои интиқол чӣ гуна муайян кардан мумкин аст? - (Фев/09/2006)

Ман бояд плазмидро (ба яке аз ҳамкорони лабораторияи мо) тавассути коғази филтр фиристам. Оё касе метавонад ба ман тартиби дақиқи иҷрои онро гӯяд: миқдори ДНК-ро бояд муайян кард, кадом коғазро истифода бурдан лозим аст, то чанд вақт иҷоза додан лозим аст ва ғайра. Ташаккур.

Шумо танҳо метавонед плазмиди худро дар як пораи коғази филтр пайдо кунед. Пеш аз дидан, шумо метавонед бо истифода аз қалам дар рӯи коғаз доира кашед, то қабулкунанда донад, ки он дар куҷост. Дар бораи миқдори плазмиде, ки шумо метавонед муайян кунед, маҳдудияти воқеӣ вуҷуд надорад, ҳамааш аз консентратсияи ДНК-и шумо вобаста аст.

Пас, шумо пораи коғази филтрро дар ҳуҷайраҳои комп тар карда, табдил медиҳед ё чӣ?

Ман қаблан дар бораи ин техника шунида будам, аммо ман онро санҷидаам.

Пас, шумо пораи коғази филтрро дар ҳуҷайраҳои комп тар карда, табдил медиҳед ё чӣ?

Ман қаблан дар бораи ин техника шунида будам, аммо ман онро санҷидаам.

шумо пораи коғази филтрро дар TE тар мекунед (ман нӯги безарарро гирифта, каме кӯфтед) пас 5-10ул бигӯед ва табдил диҳед.

эй, Мэтт, агар шумо дар ҷустуҷӯи баъзе маълумотномаҳои техникӣ бошед, он ҳамчун маҳсулот бо номи Clonesaver дастрас аст


Тартиби таҷрибавӣ

Векторро ҳазм ва тоза кунед:

Ҳангоми интизории расидани олигоҳои шумо, тайджести маҳдудкунандаи 1μг векторро бо EcoRI ва SaI гузаронед.

Як гели агарозро иҷро кунед ва бандеро, ки ДНК-и вектори худро дорад, буред

Гель бо истифода аз маҷмӯаи дар тиҷорат дастрас ё протоколи стандартӣ ДНК-и худро аз агароза тоза кунед.

Олигоҳои хушбӯй:

Олигоҳо бояд дар буфери тозакунӣ (10mM Tris, pH7.5-8.0, 50mM NaCL, 1mM EDTA) дубора боздошта шаванд ва дар консентратсияи эквимолярӣ омехта карда шаванд. Мо тавсия медиҳем, ки ҳар яки он 2 мкгро дар ҳаҷми умумии 50 мкл омехта кунед - агар лозим бошад, барои ба 50 мкЛ расидан буфери иловагии гармкуниро илова кунед. Тавассути пурсамар бо яке аз ду усул ба даст овардан мумкин аст:

Олигоҳои омехтаро дар найчаи микрофугҳои 1,5 мл ҷойгир кунед.

Тубро дар блоки гармии 90-95°С ҷойгир кунед ва 3-5 дақиқа тарк кунед.

Блоки гармро аз манбаи гармӣ хориҷ кунед (блокро хомӯш кунед ё ба болои курсӣ гузаронед), то ҳарорати хонагӣ суст хунук шавад (

Олигоҳои омехтаро дар найчаи PCR ҷойгир кунед.

Тубро дар термоцикл ҷойгир кунед, ки барои 2 дақиқа дар 95 ° C оғоз шудан барномарезӣ шудааст.

Сипас, тадриҷан то 25 ° C дар тӯли 45 дақиқа хунук кунед.

Лигатсионӣ:

5 мкл олигоҳои тозашударо бо оби 45 мкл аз нуклеаз об кунед ва миқдори консентратсияро муайян кунед (бояд тақрибан 8 нг/мкл бошад).

Олигоҳои тозашударо бо вектори буридашуда бо таносуби молярӣ (вектор: ворид кардан) дар реаксияи стандартии ligation омехта кунед (масалан, барои пайваст кардани олигои тозашуда бо дарозии 50 бит ба вектори 5 кб, 100 нг омехта кунед. вектори дорои 0,75-6 нг олигоҳои тозашуда).

2-3μL -ро ба бактерияҳо ва табақҳои дӯстдоштаи худ табдил диҳед.

Боварӣ ҳосил кунед, ки колонияҳои сершуморро барои тайёр кардани мини-тайёр кунед ва воридкуниро тавассути пайдарпай тафтиш кунед.


Намудҳои плазмидҳои назоратӣ

Қисми банақшагирии таҷрибаи шумо муайян кардани кадом омилҳоро барои бартараф кардани ҳама гуна тафсири алтернативии натиҷаҳо назорат кардан лозим аст. Одатан, таҷрибаҳо дар асоси плазмидҳо назоратҳои трансфексия, манфӣ, мусбат ва такрориро истифода мебаранд.

Назорати интиқол: вектори холӣ ва назорати дохилӣ

Назорати трансфексия самаранокии трансфексияро чен мекунад ва имкон медиҳад, ки ҳама гуна таъсири худи трансфексия (яъне векторе, ки дар трансфекция, реагенти трансфексия ё раванди трансфексия истифода мешавад) ба ҳуҷайраҳои мавриди ҳадаф дошта бошад. Як назорати трансфексия назорати вектори холӣ аст, махсусан плазмид бе тағирёбандаи мустақил. Бо истинод ба таҷрибае, ки бо расми 1 алоқаманд аст, тағирёбандаи мустақил shRNA мебошад. Аз ин рӯ, вектори холии назорат Plasmid A sans shRNA ё танҳо сутуни Y хоҳад буд. Назорати вектори холӣ ба шумо имкон медиҳад, ки тафтиш кунед, ки оё реагентҳои трансфексия ё худи раванди интиқол ба ҳуҷайраҳои мавриди ҳадаф ягон таъсири ситотоксикӣ доранд.

Навъи дигари назорати трансфексия вектори назорати дохилӣ мебошад, ки самаранокии интиқолро чен мекунад. Назорати дохилӣ метавонад плазмиде бошад, ки ба таври конститутсионӣ сафедаи хабарнигорро (масалан, GFP ё люцифераза) ифода мекунад, ки ё бо плазмиди санҷишӣ якҷоя карда мешавад ё ба чоҳи алоҳидаи ҳуҷайраҳои шумо трансфексия карда мешавад. Сарфи назар аз он, миқдори фаъолияти протеини гузоришдиҳанда ҳам ба миқдори ДНК-и ба ҳуҷайраҳо интиқолшуда ва ҳам қобилияти ҳуҷайраҳо барои ифода кардани сафеда алоқаманд аст.

Ҳангоми таҳлили натиҷа дар расми 1, назорати дохилӣ, ба монанди Плазми B-и GFP, метавонад нишон диҳад, ки оё ҳуҷайраҳо бомуваффақият трансфексия шудаанд ва сафедаро ифода мекунанд. Масалан, тасвирҳои микроскопияи флуоресцентӣ, ки дар натиҷаи озмоиши мо, ки назорати дохилии дар боло зикршударо дар бар мегирад ва бо натиҷаи расми 1 мувофиқат мекунад, метавонанд чунин бошанд:

Тасвири 2: Ифодаи плазми В (ҳамчун назорати дохилӣ)

Ин натиҷа нишон медиҳад, ки интиқол аз сабаби набудани флуорессенсияи GFP аз ҳуҷайраҳои зинда ва қобили ҳаёт муваффақ набуд. Ин натиҷа барои бартараф кардани мушкилот ва оптимизатсияи реагентҳо ва равандҳои интиқол имконият фароҳам меорад. Қайд кардан муҳим аст, ки шароити оптималии таҷрибавӣ, аз ҷумла чӣ қадар ДНК-и плазмидӣ барои ҳар як инфиродӣ ё трансфексия истифода мешавад, бояд ба таври эмпирикӣ муайян карда шавад.

Назорати манфӣ: ҳуҷайраҳои коркарднашуда, назорати векторҳои холӣ ва назорати ғайриҳадаф

Шароитҳои назорати манфӣ ва плазмидҳо бояд таъсири нулро ба вуҷуд оранд (яъне ягон падида мушоҳида намешавад). Дар ҳама гуна озмоише, ки дар асоси плазмид асос ёфтааст, ҳуҷайраҳои коркарднашуда бояд дохил карда шаванд, зеро онҳо заминаи асосӣ/стандартро таъмин мекунанд, ки бо он намунаҳои дигар муқоиса карда мешаванд.

Назорати вектори холӣ (дар боло зикршуда) метавонад ҳамчун назорати муҳими манфӣ хизмат кунад. Дар ин замина, назорати вектори холӣ ҳама гуна таъсири худи вектор/сутунро ба ифодаи генҳо дар ҳуҷайраҳои мавриди ҳадафи шумо нишон медиҳад.

Дар таҷрибаҳое, ки технологияҳои ҳадафгирии ген ё таҳрири геномро истифода мебаранд, ба монанди RNAi ё CRISPR, назорати ғайриҳадафнок метавонанд мувофиқ бошанд, зеро онҳо ба шумо имкон медиҳанд, ки хусусияти натиҷаи мушоҳидашударо арзёбӣ кунед. Назорати ғайриҳадафӣ ин назорати манфӣ мебошанд, ки маҳсулоти шабеҳро тавлид мекунанд, аммо гени эндогениро дар ҳуҷайраҳои таҷрибавии шумо ҳадаф намегиранд. Масалан, дар таҷрибаи дар боло овардашуда, Plasmid A дорои shRNA мебошад, ки гени X-и инсонро ҳадаф қарор медиҳад ва ҳуҷайраҳои инсон интиқол дода мешаванд. Назорати дурусти мақсаднок дар ин таҷриба метавонад як shRNA бошад - дар ҳамон сутуни плазми А, ки ягон гени ширхӯронро ҳадаф намегирад. Ин назорати ғайриҳадафнок барои тафсири дурусти натиҷаҳо муҳим аст, зеро он як нуқтаи муҳими истинодро ҳангоми таҳлили мушаххасоти shRNA, ки ба Ген X-и инсон нигаронида шудааст, фароҳам меорад. Назорати ғайриҳадафӣ инчунин ҳама гуна таъсири ҷорӣ кардани shRNA-ро ба шумо арзёбӣ мекунад. ҳуҷайраҳои мақсаднок.

Назорати мусбӣ

Плазмидҳои назоратии мусбат бояд падидаи пешбинишударо ба вуҷуд оранд. Як мисоли назорати мусбӣ, вектори назорати дохилӣ, қаблан тавсиф карда шуда буд. Вақте ки шумо мутмаин ҳастед, ки шароити шумо барои бомуваффақият интиқол додани ДНК-и плазмидӣ ба ҳуҷайраҳо мусоид аст, вектори назорати дохилӣ пас аз он ҳамчун назорати мусбат барои трансфекция хидмат мекунад, зеро он таъсири интизоршавандаро ба вуҷуд меорад, ки ҳуҷайраҳои сабзи флуоресцентӣ мебошад (Расми 3).

Расми 3: Ифодаи плазми В (ҳамчун назорати мусбат)

Дигар назорати мусбӣ ба таҷриба хосанд ва бояд мувофиқи он тарҳрезӣ шаванд. Агар шумо кӯшиш кунед, ки генро фаъол созед, шумо бояд назоратеро тарҳрезӣ кунед, ки фаъолсозии ҳадди аксарро нишон медиҳад. Ба ҳамин монанд, агар шумо кӯшиш кунед, ки як генро репрессия кунед, назорати шумо метавонад системае бошад, ки ифодаи ин ген комилан аз байн меравад. Ин назоратҳо вобаста ба эҳтиёҷоти таҷрибавӣ метавонанд ба плазмид асос ёбанд ё набошанд. Бо истифода аз таҷрибаи мо ҳамчун мисол, натиҷаи интизории shRNA, ки гени X-и инсонро дар плазмиди А ҳадаф қарор медиҳад, коҳиши ифодаи ген X мебошад. Аз ин рӯ, назорати мусбӣ бояд ифодаи Ген X-ро кам кунад.

Азбаски хусусияти асосии плазмиди назоратӣ кам кардани таъсири тағирёбандаҳои ғайримустақил дар таҷриба аст, ҳам тарҳрезӣ ва ҳам интихоби плазмидҳои мусбати назоратӣ бояд ба таҷриба ва пурсиши тағирёбандаи мустақил хеле мушаххас бошанд.


Репликатсия чӣ гуна оғоз ва қатъ мешавад?

Илова ба генҳо, плазмидҳо аксар вақт промоутерҳои транскрипсия ва терминаторҳоро дар бар мегиранд, ки аз онҳо гирифта шудаанд E.coli фагхо. Промоутерҳо аз фагҳои SP6 ва T7 аксар вақт истифода мешаванд in vitro амплификацияи РНК. Онҳо полимеразҳои фагро талаб мекунанд ва аз ин рӯ ғайрифаъол мебошанд дар vivo.

Дар поён а харита аз pTLNX, вектори ифодаи оосити Xenopus (Расми 2). Илова ба пайдоиши pBR322 ва генҳои муқовимати антибиотик AmpR ва CmR (муқовимати хлорамфеникол), инчунин промоутерҳои SP6 ва lacUV мавҷуданд. Дар поёни промоутер SP6, терминатори rrnBT2 имкон медиҳад, ки генҳои ба сайти клонкунии сершумори 2 клононидашуда самаранок қатъ карда шаванд (Расми 2).

Вектори pTLNX инчунин як ген барои интихоби плазмидҳо (ccdB) дар якҷоягӣ бо сигнали локализатсияи ядроии вируси SV40 ва Xenopus globine 3' UTR дорад, ки имкон медиҳад сатҳи баланди ифодаи генҳои клононидашуда.


Бисёре аз бактерияҳо дорои унсурҳои иловагии ДНК-и хромосомӣ мебошанд плазмидҳо. Инҳо одатан хурд (якчанд 1000 bp), молекулаҳои даврашакл ва дуқатор мебошанд, ки новобаста аз хромосома такрор мешаванд ва метавонанд дар шумораи зиёди нусхаҳо дар дохили ҳуҷайра мавҷуд бошанд. Дар ваҳшӣ, плазмидҳо метавонанд дар байни шахсони алоҳида ҳангоми ҷуфтшавии бактерияҳо интиқол дода шаванд ва баъзан ҳатто байни намудҳои гуногун интиқол дода мешаванд. Плазмидҳо дар тиб махсусан муҳиманд, зеро онҳо аксар вақт генҳои патогенӣ ва муқовимат ба доруҳоро доранд. Дар лаборатория плазмидҳоро ба бактерияҳо дар раванде, ки трансформатсия номида мешавад, ворид кардан мумкин аст.

Барои ворид кардани порчаи ДНК ба плазмид, ҳам порча ва ҳам плазми даврашакл бо истифода аз ферментҳои маҳдудкунанда, ки нугҳои мувофиқро тавлид мекунад, бурида мешаванд (Расми (PageIndex<1>)). Бо дарназардошти шумораи зиёди ферментҳои маҳдудкунандае, ки дар айни замон дастрасанд, одатан пайдо кардани ферменте душвор нест, ки пайдарпаии шинохти мувофиқи он ҳам дар плазмида ва ҳам дар порчаи ДНК мавҷуд аст, алахусус аз он сабаб, ки аксари векторҳои плазмиде, ки дар биологияи молекулавӣ истифода мешаванд, тарҳрезӣ шудаанд. ки дорои сайтҳои эътирофи шумораи зиёди эндонуклеазҳои маҳдудкунанда.

Тасвири (PageIndex<1>): Клонкунии порчаи ДНК (сурх) ба вектори плазмид. Вектор аллакай дорои гени интихобшавандаи маркер (кабуд) ба монанди гени муқовимати антибиотик мебошад. (Асли-Дейхолос-CC:AN)

Пас аз ҳозимаи маҳдуд, порчаҳои дилхоҳро пеш аз омехта кардан бо лигаза барои пайваст кардани онҳо минбаъд тоза кардан ё интихоб кардан мумкин аст. Пас аз инкубатсияи кӯтоҳ, плазмидҳои нав пайваст карда мешаванд, ки гени таваҷҷӯҳ доранд. табдил дода шудааст ба E. coli. Трансформатсия тавассути омезиши ДНК-и пайвастшуда бо он анҷом дода мешавад E. coli ҳуҷайраҳое, ки махсус омода карда шудаанд (яъне салоҳиятдор) барои гирифтани ДНК. Ҳуҷайраҳои салоҳиятдор метавонанд тавассути таъсири пайвастагиҳо ба монанди CaCl сохта шаванд2 ё ба майдонҳои электрикӣ (электропоратсия). Зеро танҳо як қисми хурди ҳуҷайраҳое, ки бо ДНК омехта шудаанд, воқеан табдил меёбанд, а аломати интихобшаванда, ба монанди ген барои муқовимати антибиотик, одатан дар плазмид низ мавҷуд аст. Пас аз трансформатсия (якҷоя кардани ДНК бо ҳуҷайраҳои салоҳиятдор), бактерияҳо дар лавҳаи агари бактериявӣ, ки дорои антибиотики мувофиқ мебошанд, паҳн карда мешаванд, то танҳо он ҳуҷайраҳое, ки воқеан плазмидро дар бар гирифтаанд, тавонанд афзоиш ва колонияҳо ташкил кунанд. Он метавонад баъдан интихоб карда шавад ва барои омӯзиши минбаъда истифода шавад.

Биологҳои молекулавӣ плазмидҳоро ҳамчун векторҳо генҳои ҷолиберо, ки дар ДНК-и клоншуда мавҷуданд, дар бар гирад, афзоиш диҳад, интиқол диҳад ва баъзан ифода кунад. Аксар вақт, қадами аввалин дар таҷрибаи биологияи молекулавӣ ин аст клон кардан (яъне нусхабардорӣ кардан) як генро ба плазмид, пас ин плазми рекомбинатро дубора ба бактерияҳо табдил диҳед, то ҳангоми тавлиди бактерияҳо нусхаҳои аслан номаҳдуди ген (ва плазмиде, ки онро интиқол медиҳад) сохта шаванд. Ин як зарурати амалӣ барои коркарди минбаъдаи ДНК аст, зеро аксари усулҳои биологияи молекулавӣ барои кор кардан бо як молекула дар як вақт ба қадри кофӣ ҳассос нестанд. Аз ин рӯ, бисёре аз таҷрибаҳои клонкунии молекулавӣ ва рекомбинатсия равандҳои такроршаванда мебошанд, ки дар онҳо:

  1. порчаи ДНК (одатан тавассути ПТР ва/ё ҳозимаи маҳдуд ҷудо карда мешавад) ба буридаи плазмида бо ферментҳои мувофиқи маҳдудкунанда клон карда мешавад.
  2. плазмиди рекомбинатй ба бактерия мубаддал мешавад
  3. Ба бактерияҳо иҷозат дода мешавад, ки одатан дар фарҳанги моеъ афзоиш ёбад
  4. миқдори зиёди ДНК-и плазмиди рекомбинатӣ аз фарҳанги бактерия ҷудо карда мешавад
  5. Манипуляцияҳои минбаъда (масалан мутагенези ба макон равонашуда ё ворид кардани порчаи дигари ДНК) дар плазмиди рекомбинантӣ гузаронида мешаванд.
  6. плазмиди тағирёфта пеш аз коркарди минбаъда ё барои ифода боз ба бактерия табдил меёбад

Истифодаи клонкунии молекулавӣ: истеҳсоли инсулини рекомбинантӣ

Протеини тозашудаи инсулин барои табобати диабет муҳим аст. Пеш аз

1980, инсулин барои истифодаи клиникӣ аз ҷасади одамон ё аз ҳайвоноти кушташуда ба монанди хук ҷудо карда шуд. Инсулини аз инсон тавлидшуда одатан хосиятҳои беҳтари фармакологӣ дошт, аммо дар таъминоти маҳдуд буд ва хатари интиқоли бемориро дошт. Бо клон кардани гени инсулини инсон ва ифодаи он дар E. coli, миқдори зиёди инсулини шабеҳи гормони инсонро метавон дар ферментаторҳо бехатар ва самаранок истеҳсол кард. Истеҳсоли инсулини рекомбинантӣ инчунин имкон медиҳад, ки вариантҳои махсуси сафеда истеҳсол карда шаванд: масалан, бо иваз кардани якчанд аминокислотаҳо, шаклҳои дарозмуддати гормонро ба вуҷуд овардан мумкин аст. Гормонҳои фаъоли инсулин дорои ду порчаи пептидӣ аз 21 ва 30 аминокислотаҳо мебошанд. Имрӯз, аслан тамоми инсулин аз манбаъҳои рекомбинантӣ истеҳсол мешавад (Расми (PageIndex<2>)), яъне генҳои инсон ва ҳосилаҳои онҳо, ки дар бактерия ё хамиртуруш ифода шудаанд.

Тасвири (PageIndex<2>): Як шиша инсулин. Аҳамият диҳед, ки нишона пайдоишро ҳамчун &ldquorDNA&rdquo номбар мекунад, ки ДНК-и рекомбинантиро ифода мекунад.(Flickr-DeathByBokeh-CC:AN)


Плазмид як молекулаи даврии дуқабата ДНК аст, ки одатан дар бактерияҳо пайдо мешавад, ки қодир аст новобаста аз ДНК-и хромосомаи ҳуҷайра такрор шавад. Одатан, плазмидҳо ба бактерияҳо имкон медиҳанд, ки баъзе бартариҳоро ба монанди муқовимати антибиотикҳо инкишоф диҳанд. Як ҳуҷайраи бактериявӣ метавонад зиёда аз як плазмид дошта бошад, генҳоро дар ин плазмидҳо ифода мекунад ва ҳангоми тақсим шудан ҳар як плазмидро такрор мекунад. Бо ин роҳ ҳар як ҳуҷайраи духтар нусхаи плазмидро ба даст меорад. Плазмидҳо аксар вақт барои клонсозӣ истифода мешаванд, зеро генҳои ҷолиб (порчаҳои ДНК) метавонанд ба плазмидҳо ворид карда шаванд ва ба бактерияҳо тавассути бактерия ворид карда шаванд. табдил додан. Ҳангоми табдили бактерияҳо, бактерияҳои салоҳиятдор, ки девори ҳуҷайра ба маводи генетикӣ гузаранда шудааст, метавонанд плазмиди хориҷиро гиранд. Бактерияҳоеро, ки плазмидро гирифтаанд, одатан тавассути парвариши бактерияҳо дар антибиотики муайяне интихоб кардан мумкин аст, ки ДНК плазмид ба он муқовимат мекунад. Ҳамин тариқ, вақте ки бактерияҳо плазмидро тақсим мекунанд ва ба ин васила генҳо дар онҳо афзоиш меёбанд.

Инҳо ферментҳое мебошанд, ки ДНК-ро дар ҷойҳои мушаххаси шинохтан буридаанд, ки дарозии онҳо одатан аз 4 то 8 ҷуфти пойгоҳ доранд. Сайтҳо одатан палиндромӣ мебошанд, яъне онҳо якхеларо ба пеш ва ақиб мехонанд. Ферментҳои маҳдудкунанда инчунин нӯгҳои "часпак" ё "кунд"-ро ба вуҷуд меоранд. Ин нуқтаҳоро барои ворид кардани гени манфиатдор ба плазмид тавассути ligation истифода бурдан мумкин аст.

Мисол. Нуқтаи часпанда, ки пойгоҳҳо пас аз буридан ҷуфт карда намешаванд

Мисол. Нуқтаи кунд, ки пас аз буридан ҳама пойгоҳҳо ҷуфт карда мешаванд


Размерхои нав

Дар Пойгоҳи додаҳои CGSC аз E. coli маълумоти генетикӣ дар бар мегирад генотипҳо ва маълумот барои маълумот штамм дар коллексияи CGSC, номҳо, синонимҳо, хосиятҳо ва мавқеи харита барои генҳо, маҳсулоти ген маълумот ва маълумот дар бораи мушаххас мутатсияҳо ва истинод ба адабиёти ибтидоӣ. Версияи ҷамъиятии пойгоҳи додаҳо ин маълумотро дар бар мегирад ва онро мустақиман тавассути ин CGSC DB WebServer дархост кардан мумкин аст. Барои кӯмак, истинодҳои кӯмакро дар боло ва дар ҳар як варақаи дархост ҷойгир кунед ё мустақиман бо мо тамос гиред.


Саволҳои FAQ - Интиқоли экспресс (eShipGlobal)

Не. Вақте ки шумо eShipGlobal-ро истифода мекунед, шумо рақами ҳисобро ворид намекунед. Рақами ҳисоб аллакай дар eShipGlobal барои Yale барномарезӣ шудааст ва барои корбарони ниҳоӣ дастрас нест.

  • дурустии ҳисоббаробаркуниро тавассути тасдиқи пардохт такмил медиҳад
  • вақт ва пулро сарфа мекунад
  • ба шумо нархи тахфифи Йелро пешкаш мекунад
  • имкон медиҳад, ки фармоишҳои шуморо пайгирӣ кунед
  • самаранокиро тавассути дастрасии зуд ба иттилооти ирсолкунанда/қабулкунанда зиёд мекунад
  • почтаи электронӣ пайгирии иттилоот ба дигарон, агар лозим бошад

Истифодаи eShipGlobal усули тавсияшаванда барои фармоиш додани хадамоти интиқоли экспресс дар Йел мебошад.

Бале. Йел аз FedEx, UPS, DHL ва USPS нархҳои байналмилалии рақобатпазир мегирад, аз ин рӯ истифодаи eShipGlobal барои интиқоли байналмилалии FedEx, UPS, DHL ва USPS бо ин сабаб ва инчунин дигар бартариҳои дар боло номбаршуда тавсия дода мешавад.

Не. Дар айни замон eShipGlobal танҳо барои истифода бо дастурҳои пуркунии донишгоҳ сохта шудааст, на кортҳои кредитии шахсӣ, ки барои коркарди амалиёти шахсӣ лозим аст.

Агар шумо хато кунед ё бояд тамғаро навсозӣ кунед, шумо бояд интиқолро бекор кунед ва тамғаи нав эҷод кунед. Лутфан қайд кунед, ки шумо тамғаро таҳрир ё дубора истифода карда наметавонед. Аз рӯи тарҳ, ҳар як баста бояд тамғаи ягонаи интиқолӣ дошта бошад, зеро ҳар як штрих-код нуқтаи назорат барои интиқолдиҳанда мебошад.

Хабари хуш ин аст, ки eShipGlobal инчунин ба шумо имкон медиҳад, ки интиқолро худатон бекор кунед ва тамғаи нав эҷод кунед, ба ҷои занг задан ба интиқолдиҳанда барои бекор кардани интиқол, ки одатан ба $10 ҳаққи ислоҳ оварда мерасонад.

Пас аз он ки интиқол дар қуттии партофташуда ё аз ҷониби интиқолдиҳанда гирифта шудааст, бекор кардани интиқол хеле дер аст.

Гарчанде ки шумо барои интиқолҳое, ки аз ҷониби интиқолдиҳанда қабул нашудаанд, ҳисобнома намегиред, тавсия дода мешавад, ки тамғакоғазҳои истифоданашударо бекор кунед. Барои бекор кардани ҳамон рӯз, клик кунед Интиқоли ман аз дохили равзанаи асосии паймоиши eShipGlobal, пас Таърихи интиқолро интихоб кунед, Рақами пайгирӣ ё рақами фармоишро дар қуттии додашуда ворид кунед, клик кунед тавлид, бастаеро, ки мехоҳед бекор кунед, интихоб кунед ва сипас клик кунед Бекор кардан.

Агар шумо қаблан тамғаи интиқолро эҷод карда бошед, ки аз санаи дигар аст (на имрӯз), лутфан ба суроғаи почтаи электронӣ ирсол кунед & # 115 & 117 & 112 & 112 & # 111 & # 114; 103& #108& #111 #98 #97 #108 #46 #99 #111 #109. Дар почтаи электронӣ рақами пайгирии интиқол, ки шумо мехоҳед бекор кунед, дохил карда шавад ва eShipGlobal интиқолро аз номи шумо бекор мекунад.

Бале, агар шумо қуттии таркандаро, ки ба интиқолдиҳанда тааллуқ дорад, истифода набаред ё бо интиқолдиҳанда ҷадвали муқарраршудаи интиқол дошта бошед, шумо ба ҳар ҳол бояд хадамоти интиқолро барои гирифтани бастаи худ барои интиқол огоҳ созед.

eShipGlobal дорои хусусияти қулай бо номи Drop Locator мебошад. Шумо танҳо интиқолдиҳандаи интиқолро интихоб мекунед ва суроғаи худро нависед ва он қуттии афтандаеро, ки ба шумо наздиктар аст, ҷустуҷӯ мекунад.

Пас аз дастрасӣ ба eShipGlobal, дар болои саҳифа барои дастурҳо оид ба фармоиш додани мавод аз FedEx, UPS, DHL ва USPS ба "Таъминот" клик кунед.

Маводҳои тадқиқотӣ одатан ҳамчун маводе муайян карда мешаванд, ки дар муҳити лабораторӣ истифода мешаванд, аз қабили ҳайвонот, биологӣ (фарҳангҳо ё захираҳои патогенҳои одам ё ҳайвонот, агентҳои интихобшуда ё токсинҳо, маводи инсон ё ҳайвонот, микроорганизмҳои аз ҷиҳати генетикӣ тағирёфта, векторҳо, плазмидҳо ва ғайра). , химиявй ё радиоактивй ва хушк-ях.

Баъзе маводи тадқиқотӣ ҳатман хатарнок нестанд, аммо ҳангоми интиқол ба маводи танзимшаванда табдил меёбанд.

Бале. Барои беҳтар кардани мутобиқат, eShipGlobal бо системаи TMS Йел ҳамгиро шудааст. Вақте ки шумо бо Yale NetId ва пароли худ ворид мешавед, система санҷиши автоматии омӯзиширо таъмин мекунад.

Курсҳои омӯзишӣ барои моддаҳои биологӣ ва бастаҳои яхи хушк дар интернет дастрасанд. Дар аксари ҳолатҳо, агар шумо ба омӯзиш ниёз дошта бошед, шумо метавонед талаботи омӯзишро иҷро кунед ва бастаи худро дар ҳамон рӯз интиқол диҳед.

Гарчанде ки ширкат ва маълумоти тамосро тағир додан мумкин нест, зеро он ба системаи TMS барои санҷиши омӯзиш пайваст аст, шумо метавонед суроғаи интиқоли худро тағир диҳед. Аз дохили варақаи интиқоли маводҳои тадқиқотӣ дар системаи eShipGlobal, клик кунед Таҳрир тугмаи зери маълумоти интиқоли шумо. Сипас маълумоти суроғаро навсозӣ кунед ва клик кунед Тағйиротро захира кунед.

FedEx ва DHL интиқолдиҳандагони ваколатдори интиқоли маводи тадқиқотӣ мебошанд. Вақте ки суроғаи мукаммал (аз ҷумла индекси почта) пешниҳод карда мешавад, FedEx барои интиқолҳои дохилӣ ва байналмилалӣ зуд-зуд пайдо мешавад. DHL барои интиқоли байналмилалӣ пайдо мешавад.

EHS ҳама дархостҳои байналмилалии интиқолро пеш аз додани иҷозат барои идомаи интиқол баррасӣ мекунад.

-ро пахш кунед Интиқоли ман аз дохили равзанаи асосии паймоиши eShipGlobal, пас интихоб кунед Таърихи интиқоли маводҳои тадқиқотӣ. Барои филтр кардани таърихи худ, шумо метавонед рақами пайгирии интиқолдиҳанда, рақами фармоиши eShipGlobal ё диапазони санаро ворид кунед. Сипас клик кунед тавлид.

Шакли онлайни "Дархост барои интиқоли маводҳои тадқиқотӣ" бояд пеш аз интиқоли ҳама гуна маводи тадқиқотии байникампус пур карда шавад. Лутфан ба вебсайти саломатӣ ва бехатарии муҳити зист муроҷиат кунед, то ба шакл дастрасӣ пайдо кунед ё барои маълумоти бештар бо рақами 203.785.3550 занг занед.

Захираҳои Мактаби тиббӣ (Толори Стерлинги Тибб, кӯчаи Сидар 333, SHM I-E7) ва Бурҷи Биологияи Клайн (Кӯчаи Проспект 219, KBT C-11) қуттиҳо доранд, ки барои аксари интиқолҳо дорои маводи биологии анбор мебошанд. Маводҳо инчунин дар рӯзи корӣ тавассути SciQuest дастрасанд.

* Категорияи А лавозимоти боркашониро дубора истифода бурдан мумкин нест.

Лутфан бо рақами 203.432.5394 бо Маркази дастгирии молия тамос гиред, то ба интиқоли бастаҳои стандартии дохилӣ ва байналмилалӣ кӯмак расонад.

Агар шумо дар бораи гурӯҳбандии маводҳои тадқиқотӣ ё фиристодани бастаҳои дорои яхи хушк ягон савол дошта бошед, бо рақами 203.785.3550 ба саломатӣ ва бехатарии муҳити зист муроҷиат кунед.

Пас аз ворид кардани маълумоти зарурӣ барои ҳавопаймои худ, шумо тамғакоғазро дар коғази оддии дафтари сафед дар доираи ҳалли eShipGlobal чоп мекунед. Танҳо коғазро ба ним пӯшед ва танҳо як пораи коғазро дар халтаи пластикӣ бо нишон додани маълумоти интиқол гузоред ва ҳамаи шумо анҷом ёфтед! Forms are not required and copies are not necessary for domestic overnight deliveries. You can also email the package label to another sender.

There are two types of Return Shipments:

    If you create a shipment and want to include a prepaid airway bill for the receiver to send a package back to you.

After you create a shipment, from the shipment summary page, you have the option to create a return shipment

  • For Domestic shipments, you can do this for all Carriers and all package types
  • For International shipments, you can only do this for a FedEx Carrier Letter.

For Research Materials, you can use the Receive Research Materials From module to create the return shipment label. You can then email the shipper the airway bill from the shipment summary page.

When you create a shipment, select a Ship From (non-Yale address) and a Ship To (Yale address). You can then email the shipper the airway bill from the shipment summary page.

  • This can be done for Domestic and International shipments for all carriers and all package types.
    *Please note that some international shipments may require additional documentation that cannot be emailed to the shipper.

For Research Materials, you can use the Receive Research Materials From module to create the return shipment label. You can then email the shipper the airway bill from the shipment summary page.